链霉亲和素-蛋白A融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达

将合链霉亲和亲-蛋白A（Streptavidin－proteinA）融合蛋白基因的表达质粒pTSAPA导入大肠杆菌BL21（DE3），成功地表达了该融合蛋白，经SIJS－PAGE及免疫印迹等方法证实该蛋白既具有IgG的结合活性，又具生物素结合活性。     

煮挂面小技巧等3则

正煮挂面小技巧挂面是我们日常中比较常见的食物,但是很多人煮面时都有这样的困扰:煮挂面的时候总是会粘锅,有时还会煮得过烂。其实只要掌握一点技巧就能煮出不粘锅且软硬适中的面条。煮挂面时,应先在水中加少许盐,这样可以使面条筋道,同时防止粘锅。在锅底里有小气泡往上冒时就下面,然后搅动几下,盖好盖,等沸腾了再添些凉水,等水再次沸腾即熟。这样煮面条速度快,面条     

不能生吃的十种常见食物

一忌吃生鸡蛋：蛋清所含的抗生物蛋白在肠道内与生物素结合后，会阻碍人体对生物素的吸收。生鸡蛋还常含有沙门菌，会使人呕吐、腹泻。     

不同修饰基团的副溶血性弧菌适配体在磁性纳米颗粒表面的固定效果和反应活性研究

目的 研究副溶血性弧菌适配体的不同修饰基团对磁性纳米颗粒修饰效果和与副溶血性弧菌结合活性的影响。方法 采用一步合成法合成氨基修饰的磁性纳米颗粒,将其分别与氨基、生物素和羧基修饰的副溶血性弧菌适配体结合,通过紫外吸收间接分析适配体的固定率,并利用外加磁场分离目标物,平板涂布确定磁分离效果。结果 生物素修饰的副溶血性弧菌适配体与磁性纳米颗粒有更高的结合效率,为62.16%。在菌液浓度较低时,不同基团修饰的适配体与磁性纳米颗粒结合后对副溶血性弧菌的分离效果影响较小,但当菌液浓度为105 CFU/mL时,不同基团修饰对副溶血性弧菌分离效果差距明显,氨基修饰的适配体显示了更为优异的反应活性,分离率为69.24%,分别较生物素和羧基修饰的适配体高21.04%和16.26%。结论 氨基修饰的副溶血性弧菌适配体在磁性纳米颗粒表面固定后显示了更为优越的反应活性,为副溶血性弧菌分离和检测的相关应用研究提供参考。     

微生物生长法检测生物素含量方法的研究

利用生物素营养缺陷型茵株的特点,建立了简便检测天然有机物中生物素含量的微生物方法。当生物素浓度在1～4μg／L,与平板生长圈直径大小呈直线相关。用此方法检测了玉米浆、酵母膏、甜菜糖蜜中生物素的含量分别为747,248,1707μg／kg。     

生物素对L-缬氨酸发酵的影响

为研究生物素添加量对谷氨酸棒状杆菌（Corynebacterium glutamate）发酵生产L-缬氨酸的影响,以谷氨酸棒状杆菌XV0505（Leu－＋Ile－＋2-TAr＋α-ABr＋SGr）为供试菌株,考察不同生物素添加量条件下菌体量、耗糖、产酸以及副产物L-丙氨酸的情况,确定了生物素最适添加量为50 μg/L;利用膜偶联透析发酵方式有效解除了发酵生产过程中产生的反馈抑制现象,降低了副产物的产量,提高了L-缬氨酸的转化率及产量。与原单批次发酵的工艺相比,新工艺的最终L-缬氨酸总量达到106.1 g/L,产量提高了47.4%,糖酸转化率提高到34.5%。     

非荧光标记基因芯片法检测转基因成分的研究

开发了一种可同时检测四种转基因作物的高灵敏度非荧光标记（生物素标记）基因芯片方法。应用该方法检测了4种含一定浓度转基因产品（包括转基因大豆Roundup Ready、转基因玉米MON810、Bt11和转基因油菜RT73）的有证标准物质，并做了检测灵敏度试验。结果表明，该技术可同时有效检测这4种转基因产品中的11个目标基因，检测低限可达0．1％以下，在现有转基因产品检测方法（包括荧光标记基因芯片）中达到或超过最低水平，但其检测成本远低于荧光标记基因芯片法。     

L-脯氨酸摇瓶发酵条件的优化

以黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)AP117为出发菌进行了摇瓶条件下的脯氨酸发酵条件研究.正交试验结果表明,发酵培养基中蔗糖、乙酸铵、L-异亮氨酸、生物素和硫胺素的最适用量分别为4.0%、4.0%、300 mg/L400 μg/L和600 μg/L,发酵培养72 h后,L-脯氨酸积累可达57.12 g/L.同时考察了硫酸镁磷酸二氢钾不同装液量接种量和初始pH对菌株AP117积累L-脯氨酸的影响.     

高效液相色谱法测定发酵液中生物素含量

采用高效液相色谱法测定发酵液中生物素的含量.结果表明,样品浓度在5～150 μg·mL-1范围内线性关系良好,最低检测限为0.01 μg·mL-1,精密度实验的RSD为0.21%,稳定性实验的RSD为6.6%,发酵液在15 h内检测结果无明显差别,加样回收率在95%～102%之间.该方法简便、快捷、准确、重现性好,可用于发酵液中生物素的含量测定.     

HCV核心抗原N-端片段生物素化表达质粒的构建及表达

目的构建HCV核心(C)抗原N-端1～130aa片段的生物素化表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达。方法PCR扩增HCV C抗原N-端1～130aa片段的编码基因,拼接上生物素-蛋白连接酶底物肽序列(BSP),构建重组原核表达质粒pGEX4T-1-CN130BSP,转化大肠杆菌Rosetta,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE后,电转至硝酸纤维素膜上,以抗HCVC抗原的单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素对表达产物进行分析。结果PCR扩增出约466bp的目的基因片段;质粒pGEX4T-1-CN130BSP经PCR及双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定基因无突变;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约为42000,22℃诱导16h可溶性表达产物含量较高;表达的重组蛋白可被抗HCV C抗原的单克隆抗体所识别,并能特异性结合辣根过氧化物酶标记的亲和素。结论已成功构建了HCV C抗原N-端1～130aa片段生物素化表达质粒,并表达出带生物素标签的GST融合蛋白,为进一步研制HCV双抗原夹心检测试剂奠定了基础。