布病胶体金免疫层析检测方法的建立

目的建立诊断布病的胶体金免疫层析方法。方法以B.abortus 544A全菌免疫BALB/c小鼠,以杂交瘤细胞技术制备单抗,纯化后以胶体金标记,选择最佳反应模式组装试纸条,并对其进行鉴定。结果已筛选4B8、1G9、1C9和1E24株稳定分泌单抗的细胞株,以其单抗互相配对组合的试纸条均能检出B.abortus 544A菌。其中以1G9为包被抗体、4B8为金标抗体的试纸检测效果最佳,与以B.abortus 544A菌多抗为包被抗体、4B8单抗为金标抗体的试纸对比,检测结果一致,且不与其他菌发生交叉反应。对PCR检测为阳性的70份牛血清样品,两种试纸条检测结果的符合率均为100%。结论所建立的诊断布病的胶体金免疫层析法快速、简便、准确,有望用于布病的诊断。     

HPV16型免疫胶体金诊断试纸条的制备

建立一种快速、准确、简便检测高危型人乳头瘤病毒16型的胶体金诊断试纸条,以用于宫颈癌的早期筛查。用柠檬酸三钠还原法制备了酒红色的30 nm胶体金颗粒,胶体金颗粒标记的单抗的实际标记量为6μg/mL。选用了2种稳定剂BSA和PEG20000获得了稳定的金标抗体溶液。实验结果表明:第7种样品垫处理液和第7种结合垫处理液处理样品垫和结合垫组装的试纸条效果最好;试纸条检测HPV16E6蛋白为阳性,检测HPV16L1蛋白为阴性。     

人血清淀粉样蛋白A1原核表达及胶体金检测方法的建立

通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的SAA1定量检测新方法.利用大肠杆菌BL21(DE3)原核表达人血清淀粉样蛋白A1(SAA1),根据BL21(DE3)表达偏好性设计并合成SAA1蛋白基因片段,构建表达载体pET-28a-SAA1,采用CaCl2法制备BL21(DE3)感受态,热激转化法将pET-28a-SAA1转入到BL21(DE3).经表达条件优化,获得重组蛋白最佳诱导表达条件:温度30℃,时间6h,转速180rpm/min,培养基pH 7.0,IPTG浓度0.4mM,诱导表达后目的蛋白经SDS-PAGE电泳鉴定,Ni柱纯化、透析、浓缩从而获得浓度为8.09mg/ml,纯度为85%的SAA1.同时,结合胶体金标记技术,建立了SAA1胶体金免疫层析试纸检测方法,线性范围0.16~500μg/ml,最低检测限0.16μg/ml,该研究为临床体外诊断SAA1快速检测提供技术基础.     

胶体金免疫层析法快速诊断禽流感

建立了一种简便、快速、准确检测动物禽流感病毒(AIV)的胶体金免疫层析法(GICA).具体内容包括制备胶体金标记抗AIV单克隆抗体和羊抗AIV抗体,结合垫和样品垫的处理,组装免疫层析试纸条.检测动物AIV,进行敏感性和特异性评定.结果表明:测试条灵敏度可达10 ng/ml.与进口禽流感胶体金免疫层析试剂条比较,符合率达100%.本方法具有特异性强、灵敏度高、简便快速的特点,可用于禽流感的早期诊断.     

pH值对胶体金制备的影响

研究了不同的溶液pH值对胶体金颜色、粒径的影响。在不同pH值下通过柠檬酸三钠法制备胶体金溶液,利用紫外/可见光吸收分光光度计对胶体金进行扫描,得到最大吸收峰波长及峰宽;通过透射电镜观察其颗粒直径及分布,再将二者结果进行比较分析。结果显示:随着溶液pH值变小,胶体金颜色由红→蓝→黑,粒径变大。     

甲基苯丙胺免疫层析测试条的研制

采用枸橼酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒，标记甲基苯丙胺单克隆抗体，制成免疫层析测试条，建立了一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法，并用于尿液中甲基苯丙胺的检测。尿液中的甲基苯丙胺与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相二抗或抗原结合，根据是否出现肉眼可见的红色线条判断人体尿液中是否含有甲基苯丙胺。结果显示，甲基苯丙胺免疫层析测试条只与甲基苯丙胺发生特异性反应，符合中国药品生物制品检定所制定的检测甲基苯丙胺标准品的标准，灵敏度为1000μg／L，与典型的麻醉药物和镇静药物无交叉反应。甲基苯丙胺免疫层析测试条检测尿液中的甲基苯丙胺具有特异性强、灵敏度高、结果显示清楚、快速、简便、省时、实用等特点。     

胶体金免疫层析技术在兽药残留检测中的应用及发展前景

胶体金免疫层析技术作为一种新型免疫学快速诊断和检测技术,不仅具有敏感、特异、便捷、快速等特点,而且适合基层和现场使用。目前,该技术已广泛应用于兽药残留方面。文章就胶体金免疫层析法的原理、兽药残留的危害及免疫胶体金技术在畜禽产品兽药残留检测中的应用及其存在的问题和发展前景作以阐述。     

河豚毒素免疫快速检测方法研究进展

河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)是一种相对分子量小但毒性极高的非蛋白毒素,其存在于多种生物体中,对人类的健康构成严重威胁。河豚毒素快速检测方法是防止受污染河豚毒素食品进入百姓餐桌有效手段,其中免疫检测技术由于其高特异性、高灵敏度及操作简便等优点受到人们的青睐,通过对国内外河豚毒素免疫快速检测方法的研究现状进行了阐述,并与目前已有的各种检测方法进行了比较,在此基础上对河豚毒素快速检测方法的研究方向进行了展望。     

胶体金法检测幽门螺杆菌的临床价值

目的探讨胶体金法检测幽门螺杆菌感染的临床价值。方法门诊收集153例有上消化道症状的成年患者,均行13C呼气试验、胶体金法和快速尿素酶试验3种方法检查幽门螺杆菌,以13C呼气试验结果为"金标准",余两种检测方法分别与"金标准"进行比较。结果血清胶体金法可靠性较好,优于快速尿素酶法。结论胶体金法检测血清中幽门螺杆菌抗体,有较高的准确率及特异性,取材方便,操作简便,是较为理想的检测幽门螺杆菌感染的方法。