黑木耳酪氨酸酶的分离纯化与酶学性质研究

本文分离纯化了黑木耳酪氨酸酶,并对酶学性质进行了研究。采用经硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100和DEAE-Sepharose-FF柱层析对粗酶液进行分离纯化,得到电泳纯的黑木耳酪氨酸酶,比活力提高了21.43倍,酶活回收率为27.41%。该酶的酶学性质研究表明:蛋白亚基分子量为12.62ku;最适pH7.0,在中性和碱性条件下稳定;最适温度为40℃,50℃以下温度条件较为稳定;以酪氨酸为底物,米氏常数K m为5.88mmol/L,V max为64.10μmol/min。实验结果表明黑木耳酪氨酸酶具有其它酪氨酸酶相似的酶学特性。      

远东拟沙丁鱼蛋白多肽(Sardinops sagaxp olypeptide)的制备及其对酪氨酸酶的抑制作用

以远东拟沙丁鱼为原料,采用动物蛋白水解酶和风味酶联合水解,通过膜分离等工序制备远东拟沙丁鱼蛋白多肽(Sardinops sagax Polypeptide/SSP),测定其分子量的分布,以生化水平上对酪氨酸酶的抑制率、细胞水平上对小鼠B16细胞中酪氨酸酶活性及黑色素含量的抑制率为检测指标,研究SSP对酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。结果显示:SSP的重均分子量为1664 u,其分子量区间主要为500~3000 u;无论是在生化水平还是细胞水平上,SSP对酪氨酸酶都具有一定的抑制作用,且SSP还能在一定程度上抑制细胞中黑色素的合成,这一结果表明了SSP具有一定的美白功能,有望作为无毒副作用的天然酪氨酸酶抑制剂,在医药、食品、化妆品等行业具有广泛的应用前景。      

酪氨酸酶为基础的时间温度指示系统的初步研究

利用酪氨酸酶催化酪氨酸褐变的原理开发了一种新型的时间温度指示系统（TTIs）。在液态条件下,研究了不同温度对TTIs的褐变程度的影响。并且初步研究了TTIs在固相载体上的颜色变化。结果表明,反应体系在0℃和5℃时,经过0⁴8h体系的颜色由原来的无色变为褐色,最终变为明显的黑色（指示终点,灰度值42.05±2.00）,而在35℃条件下,体系的颜色经过4h就到达指示终点。进一步将酪氨酸固定在海藻酸钠-羧甲基纤维素钠混合薄膜上与酪氨酸酶液进行反应,颜色变化非常显著。实验证明,以酪氨酸酶为基础的酶型TTIs具有良好的发展前景。本研究为我国生鲜食品流通的监测提供了新的选择,为消费者选择物有所值的新鲜食品提供方便。      

花椒生物碱提取工艺及抗氧化、抑制酪氨酸酶活性研究

以花椒为实验材料,选用超声波辅助提取法提取花椒中的生物碱,应用单因素和响应面实验优化花椒生物碱的提取工艺,用DPPH法研究其抗氧化活性,并对其抑制酪氨酸酶的活性进行了研究。结果表明,花椒生物碱的最佳提取工艺条件为:超声功率233W,超声时间11min,料液比1∶16g/mL,乙醇浓度79%,花椒生物碱提取率达到1.19%。花椒生物碱对DPPH自由基清除的IC50值为0.0599mg/mL,抑制酪氨酸酶活性的IC50为1.212mg/mL,说明花椒生物碱有一定的抗氧化和抑制酪氨酸酶活性的能力,但此两种活性均弱于VC。      

柿叶多酚的提取及体外生物活性的研究

利用水以及不同体积百分比(20%、40%、60%、80%和100%)的甲醇、乙醇、丙酮时柿(Diospyros kaki cv.Mopan)叶中的多酚物质进行提取,提取率最高的不同溶剂提取物采用HP-20大孔树脂进行纯化,分别得到了水提取物(WE)、甲醇提取物(ME)、乙醇提取物(EE)和丙酮提取物(AE),并时不同提取物的体外抗氧化活性、胶原酶和酪氨酸酶抑制活性进行了分析和比较.结果表明.柿叶中的多酚含量相于27.4±0.21mg GA/g(干重).采用体积分数为60%的丙酮溶液提取柿叶多酚时.柿叶多酚的提取率最高,为74.3%±2.3%.60%丙酮提取物对1,1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)自由基的清除能力最高,达O.27±0.02μmol Trolox/mg,对胶原酶和酪氨酸酶也具有较高的抑制活性,IC50值分别为92.8 4-2.9μg/mL和185.4±5.3μg/mL.     

酪氨酸酶酶促乳铁蛋白在丝素表面的接枝

本文利用酪氨酸酶对酪氨酸残基具有催化氧化的特性,进行了酶促乳铁蛋白在丝素表面接枝效果研究。借助酪氨酸含量分析、丝素蛋白溶液黏度测定等,评价了酪氨酸酶的催化接枝效果。研究结果表明,经酪氨酸酶处理后,丝纤维中酪氨酸含量下降;与仅经乳铁蛋白处理相比,酪氨酸酶/乳铁蛋白组合后丝织物的强力、丝素蛋白溶液黏度增加,验证了酶促乳铁蛋白在丝素蛋白表面的接枝反应。此外,乳铁蛋白也会在丝纤维表面吸附,表现为酪氨酸酶/乳铁蛋白处理样与仅乳铁蛋白处理样染色性能较相近。     

大豆异黄酮对酪氨酸酶抑制作用的研究

本文对不同浓度的大豆异黄酮提取物对酪氨酸酶活性的抑制率进行了研究。结果表明,大豆异黄酮提取物对酪氨酸酶活性有比较强的抑制作用,并且随着大豆异黄酮提取物浓度的提高,其对酪氨酸酶活性的抑制率也提高。提示大豆异黄酮可通过抑制酪氨酸酶活性减少色斑产生延缓皮肤衰老。     

多糖修饰电流型测酚生物电极的响应特性

研制多糖修饰电流型测酚酪氨酸酶碳糊电极.选择了麦芽糊精作为酪氨酸酶的激活剂,采用Nafion 117膜来抗阴离子干扰,聚乙烯亚胺(PEI)作包埋剂以抗阳离子干扰,论文通过正交实验确定了以碳糊电极为基底电极的酪氨酸酶电极的各组分含量为:酪氨酸酶400 U,10%麦芽糊精溶液10μL,0.2%PEI溶液10μL,0.5%Nafion 117溶液2μL.所研制生物电极的工作条件为:工作电位-100mV vs.Hg/Hg2Cl2(s)电极,工作pH为5.40,测量时间1.0 min.在此测量条件下,所研制电极对苯酚的检测下限为5.00×10-8mol/L,线性区间为2.00×10-7mol/L～5.00×10-5mol/L,RSD=1.18%,RE=-0.60%.用所研制电极测定炼油废水中酚的含量测定结果令人满意,加标回收率为100.7%.     

Tyr/MWNTs-Chit/GCE生物传感器的制备及其在快速检测大肠杆菌中的应用

该文基于多壁碳纳米管(muhiwalled carbon nanotubes,MWNTs)-壳聚糖(Chit)复合物修饰电极制备了灵敏、稳定的酪氨酸酶(tyrosinase.Tyr)生物传感器.由于MWNTs-Chit复合物具有好的生物兼容性以及电催化能力,Tyrr/MWNTs-Chit/GCE生物传感器在苯酚的检测中具有高灵敏度(412 mA/mo1),低检测限(5.0nmol/L),较宽的线性范围(1.0×10-8～2.8×10-5mol/L)以及良好的稳定性(10天后仍保持93%的活性).把Tyr/MWNTs-Chit/GCE生物传感器进一步应用于大肠杆菌的检测,大肠杆菌在104～107 cfu/mL范围内与电流响应成正比;经过5.0 h的培养,进一步降低大肠杆菌的检测限至10 cfu/mL.     

基于壳聚糖/SiO2杂化膜固定酪氨酸酶生物传感器测定水中苯酚

用壳聚糖/SiO2杂化膜对酪氨酸酶进行固定,制备基于多壁碳纳米管修饰玻碳电极的苯酚传感器,研究其对苯酚的响应,并对溶液的pH值与工作电压等测定参数进行优化。苯酚等酚类化合物可通过酶催化产生的醌在-100 mV直接还原而测定。该传感器达到95%稳定状态电流的时间在10 s以内,测定苯酚的线性响应范围为1.0×10-8～1.5×10-4mol/L,检出限为4.0×10-9mol/L,米氏常数(Kampp)为5.78×10-6mol/L,对1.0×10-6mol/L苯酚平行测定8次的RSD为3.2%,使用三周后活性仍保持原有活性的75%。将该生物传感器用于实际水样中苯酚含量检测,回收率为93%～104%。