麦秸强化微生物降解石油烃及场地试验

在油-盐混合污染耕地的耕作层中施加麦秸以强化水浸洗盐和促进微生物对石油烃的降解.通过实验考察了麦秸添加量对降解石油烃所用的阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)和刺孢小克银汉霉菌(Cunninghamella echinulata)的生长及其对于石油烃降解行为的影响.结果发现,在土壤中添加5%(质量分数)麦秸可使土壤中的细菌和真菌生物量提高至对照样品的25和3倍;19 d时总石油烃降解率从29.2% 提高到48.0%,其中饱和烃、芳烃的降解率分别从31.5%和39.1%提高到55.7%和55.9%.在中原油田污染耕地现场试验结果表明,石油烃降解菌添加25 d后,添加麦秸的修复土壤中的细菌和真菌生物量为对照土壤的158和9倍;45 d后试验地块中的总石油烃质量分数降至0.3%以下,石油烃降解率最高达到75%.上述结果显示出添加麦秸与真菌-细菌协同修复方法相结合在治理油-盐混合污染耕地中具有很好的应用前景.     

利用肠杆菌基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)方法对阪崎克罗诺杆菌进行分子分型

阪崎肠杆菌在2008年被重新命名为克罗诺杆菌属的一个新种,是一种条件致病菌,可引起严重的新生儿脑膜炎、坏死性小肠结肠炎和菌血症,严重的可能引起神经系统后遗症和死亡.目前,越来越多的报道证明婴儿配方粉是其主要的传染源和传播媒介.利用肠杆菌基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)方法对43株克罗诺杆菌属菌株和5株肠杆菌属菌株进行分子分型,利用BioNumericus软件对其结果进行分析,如果按照相似性大于80%计算,根据辛普森方程计算该分型方法的分辨率可达到0.984.研究结果表明:ERIC-PCR是一种适用于阪崎克罗诺杆菌的快速分子分型方法,能够对由该菌引起的食品中毒事件进行快速的溯源.     

青海省祁连县红土沟—川刺沟金矿矿区地质特征

红土沟—川刺沟金矿是北祁连地区近年来新发现的河流冲积型岩金矿。矿区内主要出露的地层为下奥陶统阴沟群,矿区中断裂极为发育,矿体即赋存于下奥陶统阴沟群的中基性火山岩中的断裂破碎蚀变带中。根据电、物性资料分析,利用电阻率对红土沟金矿进行辅导找矿可行,而对川刺沟金矿进行辅导找矿效果则不明显。据矿区地球化学特征分析,水系沉积物测量异常及土壤测量异常对红土沟——川刺沟金矿指导找矿效果均较好。     

产生物膜菌株的分离鉴定及其产膜特性分析

目的:在含异噻唑啉酮类杀菌剂的腐败变质样品中分离筛选能够产细菌生物膜的菌株,并对其产膜特性进行初步研究。方法:采用平板划线法分离纯化菌株;采用微孔板结晶紫染色法筛选产生物膜菌株;通过生理生化特征和16S rDNA分子进化分析鉴定菌株种属;运用激光共聚焦电子显微镜观察分离得到的菌株在玻璃片表面形成生物膜情况,包括胞外多糖及生物膜内部活、死细菌分布;最后再次采用微孔板结晶紫染色法研究培养时间、pH值和不同碳源对该菌产生物膜的影响。结果:分离筛选出一株产生物膜菌株BF-17,并且该菌株被鉴定为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae);BF-17分别在96 h和pH为5时产生物膜量最高;静置培养4 d后,BF-17在玻璃片表面能产生典型的生物膜形态和结构;同时该菌株利用α-乳糖和D-果糖产生物膜能力最高,而利用柠檬酸产生物膜能力最低。结论:菌株BF-17产生物膜能力稳定,可以作为生物膜深入研究的材料;同时,BF-17的产膜能力易受外界环境条件的影响。     

色氨酸酶重组基因表达及其酶法合成L-色氨酸

为实现色氨酸酶高效、低成本催化合成L-色氨酸,利用p ET30a为载体在宿主细胞E.coli BL21(DE3)中重组表达了产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)来源的色氨酸酶,以丙酮酸、吲哚和氨为底物,探究其酶学性质,考察了反应温度、起始p H、底物摩尔比对酶促反应的影响,并利用丙酮酸发酵液为底物酶法合成L-色氨酸。结果表明,色氨酸酶重组表达成功,色氨酸酶最佳反应条件为:温度35℃,起始p H=9.0,底物摩尔比n(吲哚)∶n(丙酮酸)=0.6∶1,底物丙酮酸浓度为0.17 mol/L。利用重组色氨酸酶全细胞催化100 m L浓度为0.57 mol/L丙酮酸发酵液,流加浓度为4.27 mol/L吲哚酒精溶液6.5 m L,反应28 h后,L-色氨酸浓度达0.25 mol/L,吲哚摩尔转化率达91.8%。     

阴沟肠杆菌对石油烃污染物的降解特性

考察了阴沟肠杆菌E．cloacae对石油烃代表物十六烷及菲的降解特性,分析了菌在各碳源中的生长动力学曲线及各碳源的降解动力学曲线。结果表明E.cloacae在十六烷、菲、十六烷和菲的混合物这三种碳源中都能较好地生长,生长速率较高,生长过程中都有二次生长现象;E．cloacae对葡萄糖、十六烷、菲、以及十六烷和菲混合物中所含菲在1天内平均降解速率大小关系为十六烷〉葡萄糖〉菲（十六烷与菲混合）〉菲,E．cloacae对十六烷具有很强的降解能力,1天内其对十六烷的平均降解速率是其对葡萄糖的2．4倍,是对单独菲及混合菲的6200倍。最终结果表明E．cloacae是一种高效的石油烃降解菌。     

羊奶粉生产环节阪崎肠杆菌分离鉴定及其毒力基因和药敏检测

目的:分析羊奶粉生产环节阪崎肠杆菌的污染状况,分离株毒力基因携带情况以及耐药性。方法:采自某羊奶粉加工厂空气过滤车间、液态奶车间、流化床车间、喷雾干燥车间和包装车间的生产样品及环境样品共180份,按国标GB4789.40-2010和PCR方法进行阪崎肠杆菌的分离鉴定;采用PCR方法检测cpa、hly、sip和omp X毒力基因;采用琼脂稀释法测定药敏性。结果:27个采样点中有14个阪崎肠杆菌阳性点,检出率为51.9%;180份样品中有29份检出阪崎肠杆菌,污染率为16.1%;阳性样品主要为粉状和棉签涂抹样品,污染率分别为23.5%和16.9%。毒力基因检出率为100%,毒力基因类型有cpa-omp X和cpa-hly-omp X,检出率分别为79.3%,20.7%。29株菌对利福平、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、头孢西丁钠、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸的耐药率依次为100%,75.9%,6.9%,3.4%和3.4%;对其它11种抗生素均敏感,多重耐药率为6.9%。结论:羊奶粉加工厂存在阪崎肠杆菌的污染。空气流动、粉尘污染、操作人员交叉污染及生产设备清洗消毒不彻底可能是加工过程中该菌的污染途径。分离株毒力基因携带率较高,对大多数供试抗生素敏感,出现多重耐药现象。     

阪崎克罗诺杆菌标准物质研制

目的采用冷冻干燥技术制备均匀性和稳定性符合要求的阪崎克罗诺杆菌标准物质,用于实验室内部质量控制。方法对使用菌株阪崎克罗诺杆菌(45403)的生化特征、16SrRNA序列、质谱特征进行确认。采用冷冻干燥技术制备含量为103 CFU/样品的菌球。参照CNAS-GL29《标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法》,对20件样品进行均匀性检验,采用单因素方差分析对结果进行统计分析。将样品分别于-20、2、37℃条件下保藏,对其储藏稳定性和运输稳定性进行评价。组织5家实验室进行协同标定。使用20件婴儿配方乳粉作为基质对阪崎克罗诺杆菌标准物质的使用效果进行确认。结果阪崎克罗诺杆菌(45403)生化鉴定结果、16SrRNA序列的NCBIGenebank比对结果、质谱鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)。采用单因素方差分析进行均匀性检验, F=1.067, P=0.442,符合标准物质的要求。于-20℃保藏170 d,于25、37℃保藏14d后,样品仍然稳定。经5家实验室协同标定,样品含量均为103 CFU/样品。20件婴儿配方乳粉作为基质加入阪崎克罗诺杆菌标准物质进行检验,均可以检出。结论阪崎克罗诺杆菌(CMCC45403)的生化特征、16SrRNA序列分析、蛋白飞行质谱特征均符合克罗诺杆菌属的典型特征。均匀性、储藏稳定性、运输稳定性及适用性的验证实验结果均符合标准物质的要求。     

阪崎肠杆菌测试片快速准确保障乳品安全

阪崎肠杆菌是乳制品中新发现的一种病原菌．已被世界卫生组织和许多国家确定为引起婴幼儿死亡的重要条件致病菌。从2005年开始我国陆续出台了阪崎肠杆菌检测的行业标准和国家标准。虽然标准规定的检测方法准确性和灵敏度较高，但存在操作繁琐、时间长等缺陷，为了寻求更简便、快速的检测方法．本公司将选择性显色培养基结合吸水凝胶和各种载体做成一次性的测试片．     

阪崎肠杆菌分子检测研究进展

对分子生物学法检测阪崎肠杆菌的研究进展及在分子检测中内部扩增参比（内参）的应用作一综述。