响应面法优化龙须菜多糖快速溶剂萃取提取工艺及其抗炎活性研究

为了建立快速溶剂萃取技术（ASE）提取龙须菜多糖的新方法，本文以秦皇岛龙须菜为原料，利用ASE提取龙须菜粗多糖（GLP-K），以多糖得率为指标，采用单因素实验结合响应面试验法优化提取工艺条件。通过傅里叶红外光谱和高效液相色谱对多糖进行结构表征；探索GLP-K在脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞中的抗炎作用。结果表明，快速溶剂萃取法用于龙须菜多糖提取的最佳工艺参数为提取温度70℃，提取时间8.5 min，循环4次，在此条件下，多糖实验得率为9.58%±0.31%；红外光谱证实该多糖含有糖醛酸，重均分子量在4.4～747.1 kDa之间；GLP-K在浓度1000μg/mL及以下时对RAW264.7细胞增殖也无影响（P<0.001）；与模型组相比，GLPK给药组（50、100、200、300、400、500μg/mL）NO的释放量显著降低43.76%～69.47%(P<0.001)。本文丰富了快速溶剂萃取技术在多糖提取方面的研究，为龙须菜多糖的开发和利用提供实验依据。     

龙须菜酸性多糖对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

本文主要研究龙须菜酸性多糖(GLSPs)对H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用。通过流式细胞术检测GLSPs对小鼠体内肿瘤细胞的细胞凋亡和细胞周期的影响;MTT法检测GLSPs对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖能力和NK细胞杀伤活性的影响;组织病理学方法检测GLSPs对荷瘤小鼠肿瘤和免疫器官(脾脏、胸腺)的影响。结果显示,GLSPs能够促进荷瘤小鼠体内H22肝癌细胞凋亡,显著抑制肿瘤生长。以200 mg/(kg?d)和600 mg/(kg?d)GLSPs灌胃管理荷瘤小鼠28 d,小鼠的平均体积抑瘤率分别为84.65%和94.58%。免疫学试验显示,GLSPs能够明显改善荷瘤小鼠脾脏肿大和胸腺萎缩的组织病变情况,增强荷瘤小鼠免疫器官的免疫功能,同时能够有效调节荷瘤小鼠白细胞和淋巴细胞的激增,显著增强荷瘤小鼠由ConA和LPS诱导的T、B细胞的增殖能力,提高脾NK细胞的杀伤活性,多方面提高荷瘤小鼠机体的免疫水平,提示GLSPs通过免疫调节作用达到体内抗肿瘤效果。     

龙须菜藻胆蛋白免疫功能和抗氧化作用的研究

目的探讨龙须菜藻胆蛋白粗提物对小鼠免疫功能和抗氧化能力的影响。方法以硫酸铵沉淀法提取龙须菜藻胆蛋白粗提物,经口给予小鼠100、200、300(mg/kg·d)的藻胆蛋白粗提物,连续灌胃15和30d后,分别测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力及小鼠脾、胸腺指数和血红细胞SOD活性及血清过氧化脂质(LPO)含量。结果藻胆蛋白粗提物能有效增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,刺激小鼠脾脏和胸腺器官的发育;且能极显著地提高血红细胞SOD的活性,降低LPO含量。结论龙须菜藻胆蛋白粗提物具有提高小鼠免疫能力和抗氧化作用。     

调味即食龙须菜去腥工艺及气调包装

目的：研究龙须菜调味即食海洋蔬菜的加工工艺。方法：以龙须菜为原料,分别采用甘草浓缩汁和臭氧水浸泡法去腥、醋酸软化、ZnCl2护色、CaCl2保脆等方法处理海藻,再经复合调味、杀菌、气调包装并运用一级动力学模型预测产品的货架期。结果：去腥最优工艺条件为甘草浓缩汁质量分数4%、浸泡15min、臭氧水质量浓度0.2mg/L、浸泡15min;研究出4种口味的复合调味龙须菜即食产品;最佳常温气调包装的复合气体组成为CO2:O2:N2=6:1:3;常温下,调味即食龙须菜产品的货架期为7个月。结论：研究的4种龙须菜即食产品各项品质指标良好,符合国家相关海藻即食食品标准规定。     

龙须菜多糖提取工艺优化

通过L_(16)(4~4)正交试验对常规法提取龙须菜多糖的工艺进行优化;结果表明:影响龙须菜多糖热水提取的因素依次为提取时间、提取温度、料液比及醇沉浓度;常规法提取龙须菜多糖的优选方案为提取温度100℃,提取时间4h,料液比1:100,醇沉浓度60%。     

不同提取方法对龙须菜多糖性质的影响

本文以龙须菜为原料,比较了热水、超声、超声协同热水和柠檬酸提取4种方法所得多糖的性质。研究表明:柠檬酸提取所得多糖的得率最高,为17.81±0.34%,其多糖分子量和粘度较低,多糖分子量的均一性较高。抗氧化实验表明,柠檬酸提龙须菜多糖具有较高的抗氧化性,其氧自由基清除能力(ORAC)值可达298.735±6.57μmol Trolox/g,在多糖浓度为2.0 mg/m L时,DPPH自由基清除率可达65.79±0.3%,还原力为0.765±0.01,均显著高于其他方法所提多糖。柠檬酸提多糖能够有效地抑制α-淀粉酶的活性。相关性分析表明,龙须菜多糖的多糖含量及糖醛酸含量与抗氧化、α-淀粉酶抑制活性之间呈正相关,而硫酸基含量、分子量、PDI值和粘度与抗氧化、α-淀粉酶抑制活性之间呈负相关。因此,柠檬酸提取是一种有效的提取龙须菜多糖的方法。该法能有效地提高多糖得率,增加产物中糖醛酸含量,降低硫酸基含量、分子量及其粘度,并提高多糖分子量的相对均一性。     

邻苯二甲醛荧光衍生化法测定食用海藻中还原型谷胱甘肽

用质谱和光谱测定方法研究了OPA和还原型谷胱甘肽(GSH)荧光衍生化反应,发现OPA分子苯环上相邻醛基的歧化反应,使得其与GSH发生衍生化反应时生成三环和二环结构的两种衍生化产物,其中三环结构的衍生化产物具有较强的荧光发射特性。利用OPA荧光衍生化法分别测定了马尾藻、鹿角菜、龙须菜中GSH的含量。在含OPA的PBS缓冲溶液、激发波长λex=350nm时,样品溶液在428nm处发射灵敏的荧光,检测限达3.6×10-8mol/L。用标准加入法分别测定样品中GSH含量分别为:0.0714mg/g(马尾藻),0.1183mg/g(鹿角菜),0.1970mg/g(龙须菜),方法的回收率达到99.22%～100.41%。     

龙须菜纯多糖的制备及免疫活性研究

采用超滤分级、离子层析和分子筛凝胶层析方法,系统纯化龙须菜粗多糖,分离到多糖GCp F1–1B。经HPLC鉴定,GCp F1–1B为均一多糖,分子量为9.3×104 Da。紫外扫描显示其不含蛋白和核酸。高效阴离子色谱(HPAEC)分析发现,GCp F1–1B由半乳糖、果糖和葡萄糖醛酸组成,比例为14.28∶3.85∶1。生物活性研究显示,GCp F1–1B可以刺激小鼠脾淋巴细胞增殖作用和激活小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs)的作用,表明其具有良好的免疫调节活性。     

几种江蓠属海藻的ISSR标记分析

用ISSR标记对几种江蓠属海藻进行了遗传多样性的研究。所用的7种实验材料包括4株龙须菜(其中3株分别来自中国青岛、委内瑞拉和南非，及1株青岛产龙须菜的高温选育种)和细基江蓠繁枝变型、真江蓠、芋根江蓠。用9条ISSR引物进行筛选，有6条可扩增出清晰可辨条带。这6条引物在7种材料中共扩增出151条带，其中117条(77．48％)表现出多态性。根据Nei等的遗传相似性系数(S)对7种材料进行分析，结果显示青岛产龙须菜与其选育种的相似性最高(S为0．939)。在3株不同产地龙须菜中，青岛龙须菜与南非龙须菜的遗传距离最近(S为0．643)，委内瑞拉龙须菜与前两者的S分别为0．167和0．192，因此初步推断委内瑞拉龙须菜不属于龙须菜种。包括龙须菜(产自青岛或南非)在内的4种江蓠间的相似性系数在0～0．143之间。