米曲霉孢子原生质体复合诱变及高活力蛋白酶菌株选育

以沪酿3.042米曲霉的孢子原生质体为诱变对象,经溶菌酶2%+蜗牛酶2%+纤维素酶2%,33℃水浴酶解时间5h的孢子原生质体最佳制备条件作用后,对其进行紫外线-氯化锂,NTG复合诱变,并利用酪蛋白平板初筛和固体发酵测定中性蛋白酶活力复筛,筛选了8株高产中性蛋白酶突变株群,为后续的细胞融合、基因组改组等实验提供了优良的候选文库。其中最高产菌株UN97,经37℃培养40h产酶活力为6834U/g(干基),为原菌株的1.62倍,传代培养8次,遗传性能稳定。     

微生物转谷氨酰胺酶生产菌的“神舟四号”飞船搭载育种研究——搭载前地面育种试验(I)

结合“神舟四号”无人飞船的试验条件和具体搭载要求 ,对转谷氨酰胺酶生产菌株Streptomycessp .WZFF .L -M 1(酶活 1.74U/mL)的孢子和菌丝体以 1 甲基 3硝基 1 亚硝基胍 (NTG)分别进行多种地面模拟比较性的诱变育种试验 ,发现诱变处理后菌落的形态变异等特征与产酶能力相关 ,经初筛和复筛的菌种驯化选育 ,获得具优异性能的突变菌株 ,酶活得到了明显提高     

恩拉霉素高产菌株的筛选

从原始生产菌BKSFJ06出发,对其进行了紫外诱变、氯化锂与紫外复合诱变、亚硝基胍诱变和亚硝基胍与紫外的复合诱变及恩拉霉素抗性筛选工作,用HPLC检测方法,以恩拉霉素的产量为指标,筛选高产菌株。最终筛选出的最优突变菌株ERS42-101108产量提高了50%,且该菌株具有良好的遗传稳定性。通过实验内容可以看出,通过亚硝基胍和紫外复合诱变的方法,抗自身产物定向筛选出的突变株具有较优良的性质。     

微生物转谷氨酰胺酶生产菌的"神舟四号"飞船搭载育种研究——搭载前地面育种试验(Ⅰ)

结合"神舟四号"无人飞船的试验条件和具体搭载要求,对转谷氨酰胺酶生产菌株Streptomyces sp.WZFF.L-M1(酶活1.74 U/mL)的孢子和菌丝体以1-甲基-3硝基-1-亚硝基胍(NTG)分别进行多种地面模拟比较性的诱变育种试验,发现诱变处理后菌落的形态变异等特征与产酶能力相关,经初筛和复筛的菌种驯化选育,获得具优异性能的突变菌株,酶活得到了明显提高.     

类金属硫蛋白产生菌的诱变育种

本研究选取酿酒酵母Cu-3作为产类金属硫蛋白的出发菌株，采用物理（UV诱变）以及化学诱变（NTG诱变）方法进行复合交替诱变，再进行类金属硫蛋白诱导实验，得到突变菌株N-1，其类金属硫蛋白Cu—MT产量有了十分明显的提高，并且具有很好的遗传稳定性。     

复合诱变选育表面活性素(surfactin)高产菌株

为筛选抗菌脂肽表面活性素高产菌株,以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis fmbJ224为出发菌株,先后采用氯化锂(LiCl)、亚硝基胍(NTG)、甲基磺酸乙酯(EMS)和链霉素(streptomycin)进行复合诱变。结果表明：经初筛、复筛选育得到1株高产抗菌脂肽菌株LN2-3,其Surfactin产量达到239.2mg/L,比出发菌株Bacillus subtilis fmbJ224(5.25mg/L)提高了44.56倍,且该菌株具有良好的遗传稳定性。提示采用LiCl-NTG复合诱变能较大幅度的提高诱变率,可以获得抗菌脂肽高产菌株。     

胆固醇氧化酶高产菌株的复合诱变选育

为进一步提高产酶水平,本实验采用超声波联合亚硝基胍的复合诱变方法处理胆固醇氧化酶产生菌(甾短杆菌),通过1mg/mL亚硝基胍和超声(200W,50kHz,35min)同时处理细胞悬液,获得一株红色突变株,其产酶活力从0.5U/mL提高到1.21U/mL,酶活提高了140%。证明该联合诱变手段对甾短杆菌产胆固醇氧化酶具有良好的诱变效果。     

NTG对E.coli突变株聚唾液酸产量的影响

在不同的 pH条件下 ,用NTG连续处理E .coli,得到突变菌株JYⅡ 74 ;摇瓶培养 ,发酵液中聚唾液酸产量达 2 80 0mg/L ,比出发菌株提高了 130 0mg/L ,提高幅度为 72 .5 % ,且生产能力稳定 .提取发酵液中的聚唾液酸 ,红外光谱鉴定其纯度 ,13C核磁共振图谱表明 ,该多糖是一种α 2 ,8糖苷键连接的唾液酸同聚物 .     

鼠李糖脂高产菌株的亚硝基胍诱变选育研究

采用亚硝基胍辅以鼠李糖对铜绿假单胞菌MIG1.46菌株进行诱变,结合蓝色凝胶平板、油平板和发酵培养测定的选育方法,获得了鼠李糖脂产量达21.270 g/L且遗传性质稳定的菌株,产量比原菌株提高361.0 %.     

常压室温等离子体诱变选育丁烯基多杀菌素高产菌株及培养基优化

以ASAGF 2-G4为出发菌株,进行常压室温等离子体与2 mg/mL亚硝基胍的复合诱变选育。结合96孔板发酵培养进行了初筛及摇瓶复筛后,共得到高产突变菌株5株,经复筛验证获得1株高产且稳定遗传菌株2-A9,其比出发菌株产量提高30.92%。利用Pulckett-Burman实验设计筛选发酵培养基中的影响因素,得到葡萄糖、糊精、棉籽蛋白、玉米浆干粉为显著因素。利用Box-Behnken响应面实验设计优化4种影响因素,获得最优培养基配方为(g/L):葡萄糖60.0、糊精25.0、棉籽蛋白25.0、玉米浆干粉12.5、胨化牛奶10.0、Mg SO₄ 1.0、NaCl 2.0、CaCO₃ 5.0。经重复实验验证后,丁烯基多杀菌素平均产量与预测产量接近,表明该模型可行有效。