单环刺螠体壁多糖的分离纯化、理化性质及抗脂质过氧化活性

为研究和开发单环刺螠中活性多糖成分,采用酶法提取和色谱分离技术,从单环刺螠的体壁中提取分离多糖组分,采用化学和仪器分析方法对其单糖组成、分子质量等理化性质进行研究,并通过体外清除脂质过氧化物实验对其进行初步的活性评价。结果表明：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解后,单环刺螠多糖（unicinctus polysaccharide,UP）得率为5.3%。通过离子交换柱层析分离纯化后主要得到两个组分UP-1和UP-2。UP-1是主要由葡萄糖（Glc）组成的高聚葡聚糖,分子质量340 kD,而UP-2为组成复杂的类糖胺聚糖,分子质量约为7.9 kD,主要含有葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）、氨基葡萄糖（GlcN）和岩藻糖（Fuc）,还含有少量的甘露糖（Man）和氨基半乳糖（GalN）。其单糖组成Man、GlcN、GalN、Glc、Gal、Fuc物质的量比例为1.0∶1.47∶0.64∶6.49∶2.5∶3.0。和其他海洋动物来源类糖胺聚糖类似,UP-2还含有少量的硫酸基,含量为7.4%。对UP-1和UP-2进行初步体外抗氧化活性研究表明,类糖胺聚糖UP-2具有显著的脂质过氧化物清除活性,半数清除质量浓度为5.0 mg/mL。     

单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ的分离纯化及其酶学性质

目的分离纯化单一组分的单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析其酶学性质。方法单环刺螠体腔液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶过滤等方法进行分离纯化,得到单一洗脱峰酶组分,经Native-PAGE、SDS-PAGE和飞行质谱分析,测定其纯度和相对分子质量;并以酪蛋白为底物,Folin-酚试剂法测定酶活力,对其酶学性质进行分析。结果分离纯化的UFE-Ⅱ具有水解纤维蛋白的活性,其水解酪蛋白的比活力达到375.6U/mg,纯化倍数为10.3倍,回收率为14.0%。UFE-Ⅱ为单一组分,纯度达99%以上,相对分子质量为24329。UFE-Ⅱ的最适反应温度约为45℃;最适反应pH值为7.0;Ca2+、Mn2+和Fe2+是该酶的强激活剂;Fe3+、Cu2+和Pb2+对该酶活力具有一定的抑制作用;SBTI和PMSF能完全抑制酶活力,表明该酶为丝氨酸蛋白酶;糜蛋白酶抑制剂可部分抑制酶活力,亮抑酶肽、抑蛋白酶肽、苯甲脒可较弱地抑制酶活力。结论从单环刺螠体内成功分离纯化出纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析了其酶学性质,该酶具有进一步开发利用价值。     

单环刺螠内脏多糖结构的分析及其对脂质过氧化物的清除作用

为开发单环刺螠内脏中活性多糖成分,利用两步酶解法提取单环刺螠多糖,对其单糖组成、分子质量和连接方式等理化性质和结构特征进行研究,并通过体外清除脂质过氧化物实验对其活性进行初步评价。结果表明：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解后,单环刺螠内脏多糖得率为6.2%。单环刺螠内脏多糖（viscera polysaccharide,VP）分子质量约为4.1×103 u,从单糖组成可以看出,VP为组成复杂的类糖胺聚糖,主要含有葡萄糖（Glc）,其次还含有氨基葡萄糖（GlcN）、甘露糖（Man）、半乳糖（Gal）和岩藻糖（Fuc）,还含有少量的木糖（Xyl）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖醛酸（GlcUA）和氨基半乳糖（GalN）。其单糖组成物质的量比为n（Man）∶n（GlcN）∶n（Rha）∶n（GlcUA）∶n（GalN）∶n（Glc）∶n（Gal）∶n（Xyl）∶n（Fuc）＝1∶1.38∶0.87∶0.53∶0.52∶5.37∶1.38∶1.05∶2.40。VP还含有少量的硫酸基,含量为8.9%。葡萄糖作为VP中最主要的单糖,其连接方式主要为Glcp(1→、→4)-Glcp(1→、→4,6)-Glcp(1→和→3,6)-Glcp(1→。甘露糖主要含有Manp(1→、→2)-Manp(1→和→6)-Manp(1→连接方式。半乳糖含有Galp(1→和→4)-Galp(1→连接方式。而岩藻糖主要含有→4)-Fucp(1→,另外还有Fucp(1→、→3)-Fucp(1→和→3,4)-Fucp(1→连接方式。类糖胺聚糖具有丰富的生物活性,对VP进行初步体外抗氧化活性研究表明,其具有显著的脂质过氧化物清除活性,半数清除质量浓度为2.47 mg/mL。     

高效液相色谱法检测水产品中双酚A及其蓄积特征研究

目的 建立一种利用高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)联用紫外(ultraviolet absorption detector, UV)检测器检测水产品中双酚A (bisphenol A, BPA)蓄积量的分析方法并探究BPA的蓄积特征研究。方法 根据线性、极限检测、精密度和回收率等标准对该分析方法进行了验证。采用不同浓度BPA胁迫常见海洋底栖动物-单环刺螠(Urechis unicinctus),以二氯甲烷作为萃取剂,对单环刺螠肌肉进行前处理,用上述HPLC方法检测。结果 在所建立的检测条件下,采用内标外标法定量 ,BPA在质量浓度0~10 mg/L范围,浓度与峰面积呈显著正相关(r＝0.9998,P<0.01),检出限(the limit of detection,LOD)为0.247 mg/L,定量限(the limit of quantification,LOQ)为0.464 mg/L,加标回收率为99.68%,日间精密度(relative standard deviation,RSD)为2.2121.28%。单环刺螠肌肉内BPA蓄积量随着暴露浓度的增加而上升,各浓度处理组BPA蓄积量随胁迫时间的延长呈现先降后升趋势。结论 该HPLC检测方法可以检测出水产品中μg/g级BPA含量,操作简便,可用于水产品质量安全检测。BPA在单环刺螠肌肉内蓄积量随暴露时间延长,先降低后上升,具有潜在的水产品安全风险。     

单环刺蜢体壁肌酶解工艺参数的研究

采用木瓜蛋白酶水解单环刺蜢体壁肌,为体壁肌水解肽的酶法脱苦提供酶解工艺参数。研究发现,酶的添加量、pH值、酶解时间、酶解温度对氮收率和水解度均具有极显著影响,此酶的适宜添加量为3％,pH值为7．0、酶解时间为5h,酶解温度为50℃,在此条件下,单环刺螠体壁肌的氮收率和水解度分别达到69．62％和32．90％,水解液呈淡棕色。     

单环刺螠体壁肌酶解工艺参数的研究——动物蛋白水解酶

烟台海肠即单环刺螠,为国家地理标志农产品,以其体壁肌为原料进行酶解工艺参数研究.采用动物蛋白水解酶进行酶解,研究发现酶的添加量、pH、酶解时间、酶解温度对氮收率和水解度均具有极显著影响,此酶的适宜添加量为2％,pH为7.0,酶解时间为4h,酶解温度为50℃.在此适宜条件下,单环刺螠体壁肌的氮收率和水解度分别达到94.45％和48.17％,体壁肌中的蛋白质几乎被完全水解到水解液中.     

单环刺螠体壁胶原蛋白的提取及其理化性质

采用0.5mol/L醋酸提取,结合NaCl沉淀法从单环刺螠(Urechis unicinctus)的体壁中提取酸溶性胶原蛋白(ASC),并对其理化性质作初步研究。紫外光谱分析表明ASC的特征吸收波长位于228nm,初步推断所提取的蛋白为典型的胶原蛋白;氨基酸组成分析表明ASC为典型的Ⅰ型胶原蛋白;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明ASC有两条不同的α链(α1和α2链)、β链和γ链,其胶原蛋白中含有二硫键;傅里叶红外光谱(FTIR)分析表明其存在三螺旋结构;示差扫描量热仪(DSC)分析表明热变性温度(td)和热收缩温度(ts)分别为33.6℃和67.5℃。     

单环刺螠糖胺聚糖抗凝血机制初步研究

采用人乏AT-Ⅲ血浆、乏HCII血浆及两种肝素辅因子均缺乏的血浆,探讨单环刺螠糖胺聚糖的抗凝血途径;通过纠正乏因子血浆所致的凝固时间延长的能力测定人血浆凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ的活性,凝固法测定纤维蛋白原浓度;体外复钙凝血实验,研究糖胺聚糖对复钙凝血时间的影响;甲基百里酚蓝比色法测定大鼠和小鼠血清中钙离子浓度。结果表明:单环刺螠糖胺聚糖的抗凝血酶作用主要呈AT-Ⅲ依赖性,并能够钝化肝素辅因子Ⅱ抑制凝血酶的活性;单环刺螠糖胺聚糖显著降低血浆凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的活性(p0.05);糖胺聚糖可通过屏蔽血液中Ca2+,延长大鼠血复钙凝血时间,极显著降低大鼠和小鼠血液中的钙离子浓度(p0.01),且其降低血液钙离子浓度的作用极显著优于肝素钠(p0.01)。     

单环刺螠体壁肌酶解产物的营养评价及溶解性分析

通过测定单环刺螠体壁肌水解液的氨基酸组成、NSI、TCA-NSI,计算AAS和EAAI值,分析水解液的营养品质和溶解性。结果表明,水解液中18种氨基酸种类齐全,鲜味氨基酸含量丰富,其中Glu含量最高,为218.263mg/100mL,其次为Gly和Ala,再次为Asp,水解液具有浓郁的鲜美味,是良好的海鲜调味料基料。必需氨基酸评分为96~141,Leu和Ile是两种限制性氨基酸,lys含量丰富,EAAI达到86.50,EAA含量丰富,营养价值高。pH为4.5~8.0时,水解液的NSI达到97%以上,pH为7.0时NSI最高,为99.65%,且TCA-NSI也高达99.60%,水解液具有高溶解性能。     

响应面法优化开发单环刺螠罐头食品

为开发一种新型、营养的单环刺螠加工产品,该研究利用响应面法对单环刺螠罐头食品的加工工艺进行优化,在单因素试验基础上,采用三因素三水平的响应面分析法,以感官评分为响应值,研究杀菌温度、酱汁浓度、单环刺螠寸段长度对单环刺螠罐头感官品质的影响。结果表明,单环刺螠罐头的最佳工艺条件为杀菌温度116℃、酱汁浓度56.5%、单环刺螠寸段3.7 cm,在此条件下的感官评分为83.1。