提高细菌型豆豉纤溶酶活性的生产工艺优化

以用枯草芽孢杆菌DC-2为发酵菌株,以纤溶酶活性为指标,对提高细菌型豆豉的纤溶酶活性关键技术进行了研究.主要探讨了装料量、大豆含水量、种龄、接种量、发酵温度和发酵时间等因素对酶活力的影响.结果表明,能够提高细菌型豆豉的关键技术参数为:100 L容器中装入含水量为80％的大豆40 kg,然后添加2％葡萄糖,接入2％的种龄为24 h的种子液,33℃培养72 h.在此发酵条件下,豆豉浸提液的最大纤溶酶活力提高了270 IU/mL.     

高产纤溶酶霉菌固体发酵工艺条件的优化

从我国传统发酵豆制品中筛选出一株具有纤溶酶活性的霉菌菌株,初步鉴定为枯青霉,经诱变后纤溶酶活力为660U/g.本实验以其为出发菌株,对该菌株固体发酵条件进行优化,结果表明菌株产酶最佳条件为:m(麸皮)∶m(豆粕)=1∶3,自然pH值,加水量0.75ml/g物料,MnSO4·H2O和(NH4)2SO4加量分别为0.25%和1.4%,接种量17.5%,发酵温度30℃,发酵时间72h,在该条件下固体培养纤溶酶活性平均达到873.76U/g,比优化前提高了213U/g.     

豆豉纤溶酶粗提液预防小鼠高血脂的研究

通过将80只小鼠随机分成空白组、模型组、低剂量组和高剂量组，连续饲喂6周，对豆豉纤溶酶粗提液预防小鼠高血脂作用进行了研究。结果表明：低剂量组可以显著降低（P〈0．05）小鼠血清中胆固醇含量，高剂量组达到非常显著水平（P〈0．01），分别降低34．4％和54．4％。对于小鼠血清中甘油三酯的降低作用，低剂量组不显著（P〉0．05），而高剂量组则达到显著水平（P〈0．05），分别降低22％和31．7％。同高脂模型组比较，低剂量组对小鼠高密度脂蛋白的升高作用及对低密度脂蛋白降低作用显著（P〈0．05），高剂量组非常显著（P〈0．01）。两组动脉硬化指数均显著降低（P〈0．05），分别降低61．5％和54．3％。与模型组比较，低剂量组小鼠肝细胞有少量脂肪变性，高剂量组小鼠肝细胞脂肪化情况有所改善。     

豆豉溶栓酶液态发酵工艺研究

对豆豉中筛选到的1株溶栓酶产生菌-枯草芽孢杆菌HGD107,进行摇瓶和15L发酵罐液态发酵工艺研究。在最适发酵条件下,摇瓶发酵产豆豉溶栓酶酶活达到3643U/mL发酵液(尿激酶单位),15L发酵罐发酵产豆豉溶栓酶酶活达到2050U/mL发酵液(尿激酶单位)。     

枯草杆菌纤溶酶高产菌株的物理化学诱变

以枯草杆菌FM-S2作为出发菌株,经γ-射线和2.5%硫酸二乙酯复合诱变,结合牛奶蛋白平板从2341株存活菌中初筛得到200株诱变菌株,经摇瓶测定纤溶酶活性进行复筛得到7株生产性能较出发菌株显著提高的突变株,它们的纤溶酶活性超过2000UK.U/ml。其中突变株γ-DES36纤溶酶活性最高达到2719.89±242.51UK.U/ml,同时该菌株遗传性能稳定。     

黄粉虫纤溶酶的三维结构模拟与序列分析

为了深入研究黄粉虫纤溶酶的纤溶机理,用生物信息学方法对黄粉虫纤溶酶进行了三维结构模拟与序列分析。首先找到了其活性中心,利用Biosun软件的同源模建技术,模拟了黄粉虫纤溶酶的三维结构;利用Goldkey软件,对黄粉虫纤溶酶的氨基酸序列进行了分析,重点讨论了其等电点、亲水性、柔性与催化活性之间的关系,最后对纤维蛋白水解部位结构进行了分析。结果表明,黄粉虫纤溶酶的活性中心是组氨酸、丝氨酸和天冬氨酸三个氨基酸残基,位于球蛋白中心凹穴处,底物结合部位是丝氨酸、天冬氨酸和甘氨酸。从微观分子水平上阐述了该类酶水解纤维蛋白的机理是催化精氨酸-赖氨酸肽键水解,与报道的纤维蛋白的溶解机理相符。     

蚯蚓血纤蛋白溶酶提取工艺研究

以新鲜蚯蚓为材料,先采用硫酸铵沉淀出粗酶,再用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０,ＤＥＡＥ－纤维素层析方法从蚯蚓粗酶中分离纯化出血纤蛋白溶酶,为开发、生产纤溶酶提供参考。     

固体豆粕为氮源根霉12~#产纤溶酶液体发酵条件的优化

以固体豆粕为氮源,通过单因素、Plackett-Burman试验设计和正交试验,从无机氮源、胰蛋白胨、初始pH值、接种量和发酵周期方面优化了中华根霉12#产纤溶酶的液体发酵条件.试验结果表明,该菌株液体发酵产纤溶酶的适宜培养基组成为:麸皮水5%,豆粕粉6%,NaNO30.2%,NH4Cl 0.1%,胰蛋白胨2.5%,初始pH4.3;适宜的培养条件是:接种量20%,发酵周期60h,纤溶酶酶活力为182.00U/mL.     

豆豉纤溶酶冻干保护剂的研究

采用正交试验对豆豉纤溶酶冻干保护剂进行了优化。分别以脱脂乳、乳糖、明胶为正交试验因素,以不同添加量为水平。试验结果表明,影响豆豉纤溶酶冻干后残余酶活力的保护剂的主次顺序为15%脱脂奶粉>1%明胶>6%乳糖。豆豉纤溶酶冻干保护剂的最佳组合为A2B4C1,即15%脱脂奶粉与6%乳糖的体积比为1:3;纤溶酶与保护剂的体积比为1:2;残余酶活力超过90%。