荧光假单胞菌RB5产嗜铁素的发酵条件

荧光假单胞菌RB5是从土壤中分离得到的一株对禾谷丝核菌有拮抗作用的细菌.通过CAS法检测分析,发现RB5菌株能产生嗜铁素.为明确荧光假单胞菌RB5产嗜铁素的发酵条件,采用摇瓶培养发酵,利用特异光谱吸收法,研究了不同培养条件对RB5菌株嗜铁素产量的影响.最终得出RB5产嗜铁素的最佳发酵条件:起始pH 7.0,接种量2％,瓶装量90 mL/250 mL,发酵时间48 h,Fe3+质量浓度为0.8 mg/L.抑菌试验表明,优化发酵条件后的RB5发酵液(OD400值2.35)有很显著的抑菌效果,抑制率达65.28％.     

低温等离子体处理模式对冷藏南美白对虾中假单胞菌的抑菌效果及机理研究

摘 要：目的 探究低温等离子体(cold plasma, CP)处理模式对冷藏南美白对虾中常见荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)的抑菌效果及其作用机制。方法 通过CP直接处理和循环处理P. fluorescens,研究了两种处理模式下臭氧含量动态变化对P. fluorescens的生长曲线、细胞活力,生物膜形成、细胞壁、细胞膜完整性和南美白对虾菌落总数及假单胞菌数等指标的影响。结果 两种处理模式在CP处理3 min或3 cycles后,包装内臭氧含量达到最高值,分别为(850±10) mg/m3和(874±20) mg/m3。CP循环处理模式使得臭氧含量随处理循环数递增,因此获得更长的臭氧存在时间从而具有更大的抑菌能力。P. fluorescens生长曲线表明CP处理使得菌体延迟期变长且对数生长期推迟。此外,CP处理后的P. fluorescens细胞活力显著下降(P<0.05),CP-1 min,CP-3 min和CP-3 cycles组的细胞活力分别为33.03%、5.90%和4.82%。同时相比CP-3 min组,CP-3 cycles组的P. fluorescens生物膜OD值下降27.61%。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AKP)活性和核酸蛋白泄漏量结果表明,细胞壁和细胞膜完整性受损可能是P. fluorescens失活的直接原因。对虾保鲜测试结果证实,贮藏第6 d,CP-3 cycles组虾体中的菌落总数和假单胞菌数相比CP-3 min组分别降低了58.02%和79.54%。结论 CP循环处理模式通过延长对臭氧与对虾的暴露时间,提高了对P. fluorescens的灭活效果,同时还具有更优越的保鲜能力。本研究为开发基于CP技术的新型保鲜技术应用提供了理论参考。 关键词：低温等离子体;荧光假单胞菌;抑菌机制;保鲜     

Immobilization of lipase onto metal–organic frameworks for enantioselective hydrolysis and transesterification

Enzyme immobilization enhances the catalytic activity and stability of the enzyme, and also improves reusability. Metal–organic frameworks (MOFs), which possess diversified structures and porosity, have been used as excellent carriers for enzyme immobilization. Pseudomonas fluorescens lipase (PFL) has been successfully immobilized onto MOFs by covalent cross-linking to obtain a series of immobilized lipase (PFL@MOFs). PFL@MOFs are used for catalytic enantioselective hydrolysis of 2-(4-hydroxyphenyl) propionic acid ethyl ester enantiomers (2-HPPAEE) in aqueous medium and transesterification of 4-methoxymandelic acid enantiomers (4-MMA) in organic medium. The experimental results indicated that PFL@Uio-66(Zr) exhibits excellent enzymatic catalysis performances and high enantioselectives. In addition, to improve catalytic activity and reusability, PFL is modified by the polyethylene glycol (PEG) to prepare PEG-modified lipase (PFL-PEG), then PFL-PEG is immobilized onto Uio-66(Zr) to prepare PFL-PEG@Uio-66(Zr), demonstrating better reusability and catalytic activity compared with PFL@Uio-66(Zr).     

姜黄素联合乙二胺四乙酸对荧光假单胞菌的光动力灭活作用

为探讨姜黄素对荧光假单胞菌的光动力灭活（photodynamic inactivation,PDI）作用,提高光动力杀菌效果,本研究以乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA）为协同剂,对PDI的应用条件进行优化,探讨姜黄素联合EDTA对荧光假单胞菌生物膜的PDI作用,并进一步将姜黄素联合EDTA应用于新鲜猪肉的保鲜。结果表明,与空白组相比,0.5%（质量分数,下同）EDTA与75 μmol/L 姜黄素经光照（功率密度200 mW/cm2、波长460 nm、光照时间20 min）,荧光假单胞菌的菌落数对数值减小了6.40（lg（CFU/mL））,玻璃及丙烯腈二乙烯丁二烯树脂（acrylonitrile-butadiene-styrene,ABS）板表面生物膜中荧光假单胞菌菌落数对数值分别减小4.57、6.60（lg（CFU/mL））,均显著高于单独使用姜黄素组的灭活效果（P＜0.05）。新鲜猪肉经75 μmol/L姜黄素和0.5% EDTA处理并光照后（功率密度100 mW/cm2、波长460 nm、光照时间20 min）,与空白组相比,保存到第10天其表面荧光假单胞菌菌落数对数值减小3.05（lg（CFU/mL））,质量损失率为2.14%,色差ΔE随姜黄素浓度增加而增大;且处理后的猪肉随贮藏时间的延长pH值变化缓慢。说明PDI处理对猪肉的感官品质影响较小,能较好地维持猪肉pH值,对猪肉表面荧光假单胞菌有显著抑制作用。结论：姜黄素联合EDTA的PDI处理显著延长了猪肉的保鲜期,本研究可为光动力技术在食品杀菌及贮藏保鲜中的应用提供新的理论参考和技术支持。     

茶多酚对肉源腐败菌和致病菌的抑制效果

研究了茶多酚对肉源荧光假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果。设计不同浓度茶多酚溶液(0.0%、0.5%、1.0%、2.0%、2.5%),采用滤纸片法评判抑制效果。结果表明,茶多酚溶液(0.5%、1.0%、2.0%、2.5%)对荧光假单胞菌有极显著的抑制效果(P<0.01),常用的防腐剂山梨酸钾(1.0%)对其抑制效果却不显著(P>0.05)。茶多酚溶液(1.0%、2.0%、2.5%)和山梨酸钾溶液(1.0%)对鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有极显著的抑制效果(P<0.01),茶多酚溶液(0.5%)对鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌无显著的抑制效果(P>0.05)。通过茶多酚溶液的浓度与4种菌抑菌圈直径的直线相关图可以看出,茶多酚溶液的浓度与鼠伤寒沙门氏菌抑菌圈直径的相关系数最大,荧光假单胞菌次之,其次是金黄色葡萄球菌、大肠杆菌。     

荧光假单胞菌和热杀索丝菌对低温贮藏期间猪肉品质变化的影响

为研究荧光假单胞菌和热杀索丝菌与猪肉品质变化的相关性,测定了在4 ℃下贮藏猪肉的微生物菌落数、pH值、色泽（L*、a*、b*值）、质构特性、总糖含量、总挥发性盐基氮（total volatile basic nitrogen,TVB-N）值和硫代巴比妥酸反应物（thiobarbituric acid reactive substances,TBARS）值以及通过扫描电子显微镜观察猪肉肌纤维微观结构的变化。结果表明,在冷藏期间,微生物菌落数、pH值、TVB-N值、TBARS值等随着猪肉冷藏时间延长而上升,而总糖含量、L*值、a*值、硬度、咀嚼性均呈降低趋势。同时,研究发现猪肉冷藏过程中微生物的生长繁殖使其肌纤维结构发生明显变化。猪肉理化品质变化与微生物的种类和生长速率相关,热杀索丝菌的致腐败能力高于假单胞菌。相关性分析结果表明,菌落数、pH值、总糖含量、TVB-N值、TBARS值与冷藏时间密切相关,其中微生物菌落数与冷藏时间的相关性最高,可作为冷藏猪肉品质评价和货架期预测的监测指标。     

荧光假单胞菌胞外蛋白酶的纯化及特性研究

采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose FF离子交换层析、Sephacryl S-100 HR凝胶过滤层析方法对从原料乳中分离出一株荧光假单胞菌胞外耐热蛋白酶进行纯化及特性研究。将纯化后的单一蛋白酶进行SDS-PAGE分子质量测定,并考察最适温度、最适pH值、热稳定性、金属离子对其酶活性的影响及对该蛋白酶的氨基酸种类分析。纯化后蛋白酶的分子质量为47kD,经纯化后蛋白酶比活力提高了近61.38倍;最适温度和pH值分别为30℃和7.0;二硫苏糖醇对蛋白酶活性具有一定的抑制作用,Fe2+可以促进蛋白酶活性的提高;该酶具有较强耐热性,原酶液经130℃热处理3min后,残留酶活仍超过原酶液的47.67%;该蛋白酶氨基酸组成中甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)和谷氨酸(Glu)的含量占明显优势,其中Gly含量最高,物质的量分数高达42%。     

不同细菌胞外产物对腐败希瓦氏菌低温下生长代谢的影响

为研究荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens,P.fluorescens)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,A.hydrophila)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria,A.sobria)的胞外产物对腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens,S.putrefaciens)低温下生长的影响,提取这3株菌株的胞外产物与无菌脑心浸肉汤(Brain Heart Infusion,BHI)培养基混合,再将S.putrefaciens分别接种至混合培养液中,于(4±1)℃下培养12d,测定培养液中S.putrefaciens的菌落总数及胞外蛋白酶、生物膜、挥发性盐基氮(TVB-N)、总氨基酸和腐胺的变化。结果表明:P.fluorescens、A.hydrophila和A.sobria的胞外产物对S.putrefaciens的延滞期和对数期几乎没有影响,但是A.sobria的胞外产物可以抑制S.putrefaciens稳定期的生长,而且随着贮藏时间的延长,相比于P.fluorescens、A.hydrophila,A.sobria的胞外产物对S.putrefaciens的生物膜、胞外蛋白酶形成以及致腐败能力的抑制作用更强。     

Biodegradation of endosulfan isomers in broth culture and soil microcosm by Pseudomonas fluorescens isolated from soil

Bacterial isolates from endosulfan-contaminated soil were grown in minimal medium and screened for endosulfan degradation. The isolate which used endosulfan and showed maximum growth was selected for detailed study. Maximum degradation in shake flask culture by Pseudomonas fluorescens was 92.80% of α and 79.35% of β endosulfan isomers in 15?days at 20?mg/L concentration, followed by 50 and 100?mg/L, while the corresponding values in static condition were 69.15 and 51.39%, respectively. Endosulfan concentration degradation declined significantly at 50 and 100?mg/L. Concomitant to degradation, release of chloride ion exhibited positive relation, while pH decreased from 7.0 to 4.53 in agitating and 7.0–5.18 in static condition. The soil microcosm study revealed maximum endosulfan degradation in sterilized soil amended with P. fluorescens. Endosulfan diol and endosulfan ether were among the products of endosulfan metabolism in broth culture, but only endosulfan ether was detected in the soil microcosm. Endosulfan sulphate, a persistent and toxic metabolite of endosulfan, was not detected in either case. The study showed that P. fluorescens could be used effectively for bioremediation of the pesticide contaminated sites.