梅鹿辄葡萄自然发酵酵母菌群研究

利用WL营养培养基对梅鹿辄葡萄自然发酵过程中分离到的98株酵母菌进行初步鉴定,进而对代表性的菌株进行5.8S rDNA-ITS区PCR产物的限制性内切酶酶切分析.结果表明,供试的98株酵母菌属于3属3个种,分别为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)、克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyver),3种酵母菌分别占分离自该葡萄品种总酵母菌株的80.61％、13.26％、6.13％.在自然发酵的初期和中期,酵母菌的比例因是否添加SO2而有所差异,但发酵末期均以S.cerevisiae为优势菌.     

一株产几丁质酶渤海丝状真菌（Alternariatenuissima）的筛选及鉴定

以渤海湾水域获得的52株丝状海洋真菌为出发菌株,通过平板透明圈法和发酵液酶活性测定,从中筛选出一株产几丁质酶活力较高的海洋真菌mTJ04-1．1,结合形态学方法和18SrDNA．ITS序列分析对其进行鉴定,确定该菌为极细链格孢霉（AltemariatenuissimamTJ04-1-1）。该菌能在以几丁质为唯一碳源的平板上生长并产生明显透明圈,透明圈与菌落直径的比值（D／d）达N2．81。对发酵液几丁质酶活力分析结果表明,该酶最适反应温度为45℃,最适pH值为6．5,最适条件下酶活性可达3．2U／mL。     

河南省烟草赤星病病原鉴定

为明确河南省烟草赤星病病原菌的种类,从河南省不同烟区采集烟草赤星病典型病斑,分离病原菌并且做致病性测定,对确定为病原菌的菌种按国际标准方法进一步做形态和分子鉴定。结果显示分离到的85株菌株中60株被证明是烟草赤星病病原菌,从形态学上鉴定为三个种,分别是链格孢Alternaria alternata、长柄链格孢Alternaria longipes和鸭梨链格孢Alternaria yaliinifciens。其中鸭梨链格孢Alternaria yaliinifciens引起烟草赤星病属首次报道。三个种的代表菌株的5.8S rDNA ITS基因序列间及已报道的链格孢Alternaria alternata,长柄链格孢Alternaria longipes和鸭梨链格孢Alternaria yaliinifciens的5.8S rDNA ITS区均没有较大差异,证明该基因在链格孢小孢子种间较保守,不适合区分这些链格孢种。     

羊羔美酒大曲中酵母菌多样性及分子鉴定

目的：分离和鉴定羊羔美酒大曲中的酵母菌,探寻酵母菌群多样性组成,为深入研究羊羔美酒的风味特征奠定基础。方法：对羊羔美酒大曲实施多点采样、混合研磨、无菌水梯度稀释、平板画线分离、挑取酵母菌单菌落。酵母菌的形态鉴定采取菌落特征和显微细胞特征结合的方法,分子鉴定采用5.8S rDNA-ITS区域限制性内切酶片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism,RFLP）分析及序列分析法。结果：从羊羔美酒大曲中共分离出474 株酵母菌,传统形态学鉴定为14 种形态类型,经5.8S rDNA-ITS区域RFLP分析法区分为6 种分子类型。经基因序列分析,将其鉴定为分属于6 个属的6 种酵母菌,分别为：异常毕赤酵母（Pichia anomala）、酿酒酵母（Saccharomyce cerevisia）、阿氏丝孢酵母（Trichosporon asahii）、黏质红酵母（Rhodotorula mucilaginosa）、浅白隐球酵母（Cryptococcus albidus）、东方伊萨酵母（Issatchenkia orientalis）。结论：羊羔美酒大曲中酵母菌多样性丰富,除酿酒酵母外,还含有多种酵母菌辅助代谢产生各种风味物质,其中酿酒酵母为主要优势菌群。     

我国近海贝类体内帕金虫的亲缘关系

研究了我国近海贝类体内帕金虫的分布和分类。从辽宁、河北到广西、海南沿海九省区58个地点共30种主要的经济贝类采样分析,利用聚合酶链式反应(PCR)法,对样品进行rDNA-ITS序列的扩增,初步确定我国海产贝类体内帕金虫的种类及其分布。结果表明,我国具有两种rDNA-ITS序列差异较大的帕金虫,在菲律宾蛤仔、紫贻贝、毛蚶、皱纹盘鲍、牡蛎中检测出帕金虫Perkinsus olseni;在南方近江牡蛎中检测出帕金虫Perkinsus beihaiensis。     

冬虫夏草与蛹虫草融合株的原生质体诱变育种

以冬虫夏草与蛹虫草融合株为研究材料,对其原生质体进行紫外诱变,筛选优质高产的新型菌株。得到了高产菌株Y-90,虫草酸产量是出发菌株的1.80 倍,高产菌株YP-42,虫草素产量是出发菌株的1.33 倍。采用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）分子标记技术和核糖体rDNA内部转录间隔区（internaltranscribed spacer,ITS）序列分析技术对突变株的遗传变异情况进行分析。结果表明突变株的ITS序列并没有发生变化。RAPD结果显示突变株的扩增片段与亲本菌株不同,说明发生了基因突变,其高产性状是可遗传的性状,可以将其用于进一步的育种研究。     

鱿鱼丝加工中真菌菌相变化规律及优势真菌的分离鉴定

为减少鱿鱼丝加工过程中真菌污染,提高鱿鱼丝产品的质量,将传统的微生物鉴定技术与5.8S r DNA-ITS序列分析法相结合,并通过系统发育树分析,探索鱿鱼丝加工过程中真菌菌相变化规律及优势菌株。结果表明,在鱿鱼丝加工过程中,不同阶段样品中真菌数量差异显著(p0.05),在加工终点(即烘干包装后)时真菌数量高达2.61 log cfu/g,其中调味和烘干包装阶段是真菌污染的主要环节。加工终点的鱿鱼丝中分离出6种酵母菌和4种霉菌,经测序并通过National Center for Biotechnology Information(NCBI)数据库比对,确定它们分别属于假丝酵母属(Candida sp.)、隐球酵母属(Cryptococcus sp.)、座囊菌属(Dothideomycetes sp.)、胶红酵母属(Rhodotorula sp.)、丝孢酵母属(Trichosporon sp.)、茎点霉属(Phoma sp.)、青霉属(Penicillium sp.)、曲霉属(Aspergillus sp.)、枝孢霉属(Cladosporium sp.)。其中,青霉菌(M-03)和假丝酵母菌(Y-04)为鱿鱼丝加工过程中的优势菌,在加工终点时的数量分别为1.85 log cfu/g和2.15 log cfu/g。     

基于5.8 S rDNA-ITS区域的RFLP分析快速鉴定酵母菌株

酵母的核糖体5.8 S rDNA及两侧的转录间隔区(ITS)具有显著的种间差异性,可以作为鉴别酵母菌种的分类依据.通过菌落PCR扩增该区域的DNA片段,用3种限制性内切酶CfoⅠ,HaeⅢ和HinfⅠ进行酶切,电泳分析酶切片段的长度多态性(RFLP),然后查找数据库快速准确的鉴定酵母菌种.对本研究室保藏的12株酵母菌株进行分析,确认了已知种类的酿酒酵母(Saccha-romyces cerevisiaeAS 2.516)和路德类酵母(Saccharomycodes ludwigiiAS 2.243)的RFLP与数据库的信息完全一致,并对其余10株未知种类的酵母进行了菌种分类鉴定.     

凉果中优势腐败霉菌的分离鉴定

凉果加工与贮藏中霉菌污染直接影响凉果的品质。为明确凉果贮藏中优势腐败霉菌的种类,该研究对在常温贮存4个月后霉变的葡萄干、话梅、杏脯中腐败霉菌进行了分离纯化,得到7种典型腐败霉菌。将分离出的腐败霉菌回接至无菌的葡萄干、话梅、杏脯表面,进行回接侵染实验,通过凉果霉变时间确定出4株菌株为优势腐败霉菌。通过菌落形态特征、菌丝和分生孢子显微结构观察,结合核糖体内转录间隔区（rDNA-ITS）序列分析,构建系统发育,鉴定优势霉菌种属。结果表明：葡萄干的优势霉菌为芽枝状枝孢霉（Cladosporium velox）和暗黄青霉（Penicillium citreonigrum）,话梅的优势腐败菌为细极链格孢（Alternaria tenuissima）,杏脯的优势腐败霉菌为菌核青霉（Penicillium sclerotiorum）。该研究结果可为凉果腐败霉菌的分离鉴定提供可靠的方法,也可为后续凉果杀菌方法的选择,贮藏条件的优化提供依据。     

湖南省油菜品种的种传链格孢菌检测

2012年在湖南醴陵市油菜黑霉病果上经镜检和病种分离检出链格孢（Alternaria spp．）,其后检测了36个品种的种子带菌情况,华湘油12号带菌率最高（51％）。镜检结果发现链格孢菌有2种,rDNA-ITS序列分析表明,它们分别是芸薹生链格孢（A．brassicicola）和芸薹链格孢（A．brassicae）;未检测到萝卜链格孢（A．raphani）。36个品种中芸薹生链格孢分离频率最高的是华湘油12号（66％）,且全为芸薹生链格孢,而芸薹链格孢以常油杂61为最高（15％）,且全为芸薹链格孢。禾盛油868种子上未检测到链格孢菌。