通过式固相萃取净化-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定禽肉中利巴韦林的残留量

建立了通过式固相萃取净化-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定禽肉中利巴韦林残留量的方法。样品在37 ℃经酸性磷酸酯酶酶解,乙腈提取,EMR-Lipid固相萃取柱净化,以乙腈和0.1%甲酸水（含5 mmol/L甲酸铵）为流动相,经过BEH Z-HILIC色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7 μm）分离,经串联质谱仪,在电喷雾正离子模式下以多反应监测（MRM）模式测定,同位素内标法定量。对前处理条件、液相条件和质谱参数进行了系统的考察。该方法在0.05~5 μg/L质量浓度范围内线性关系良好,定量限（LOQ）为2.0 μg/kg。在2.0、4.0、20 μg/kg添加水平下,回收率为94.5%~112.0%,相对标准偏差（n=6）为1.4%~3.2%。该方法相比标准方法前处理简单、快速,适用于禽肉中利巴韦林残留的批量分析。     

利巴韦林生产废液处理的工艺研究

通过树脂的静态、动态实验吸附和层析研究,确定利用离子交换树脂层析法分离提纯利巴韦林生产废液的最佳工艺。选LSD树脂为层析介质,料液溶剂为90％乙醇水溶液,用90％乙醇水溶液和纯水进行两阶逐次洗脱。该工艺使利巴韦林的浓度由不到10％浓缩到95％以上,分离效果较好,再通过浓缩结晶得到合格的利巴韦林产品。整个工艺过程简单、无外添加物,不使用有毒溶剂、能耗小。     

树脂吸附法回收结晶废液中利巴韦林的工艺研究

通过树脂的静态、动态实验研究,确定树脂吸附法分离提纯结晶废液中利巴韦林的优化工艺。选取LSD树脂吸附分离利巴韦林,上柱溶剂为90%乙醇水溶液,洗脱剂为pH8·5的Na2CO3溶液,该工艺使利巴韦林的浓度由不到10%浓缩到80%以上。再通过浓缩结晶可得到合格的利巴韦林产品。计算了吸附柱在不同流速下的总传质系数和传质区高度,为吸附器的设计提供了重要的数据。该工艺过程简单、无外添加、不使用有毒溶剂、能耗小。     

鸡肉中金刚烷胺和利巴韦林残留基体标准物质的研制

目的建立含金刚烷胺和利巴韦林多残留鸡肉糜样自然基体标准样品的研制和定值方法。方法通过添加金刚烷胺和利巴韦林饲养白羽肉鸡获得阳性样本,然后经过取样、均质、包装、辐照灭菌、均匀性检验、稳定性检验、协同定值等过程,制备预期目标含量水平的含金刚烷胺和利巴韦林的多残留鸡肉糜样自然基体标准样品。结果经10家实验室采用液相色谱-串联质谱法进行协同定值,金刚烷胺和利巴韦林的特性值分别为10.1±1.0μg/kg(k=2),11.3±1.6μg/kg(k=2)。结论研究表明获得的样品均匀性良好,稳定性达到10个月,能够用于兽药残留检测的质量控制。     

Optimization of the process variables of roller compaction,on the basis of granules characteristics (flow,mechanical strength,and disintegration behavior): an application of SeDeM-ODT expert system

The objective of the study was application of SeDeM-ODT expert system for optimization of process variables for roller compaction and for the preparation of granules with better flow, compressibility, and disintegration behavior. In the present study, granules were prepared at pre-determined (on the basis of factorial design) process variables and characterized using SeDeM-ODT expert system. Compatibility of ribavirin with excipients (microcrystalline cellulose, tablettose-80, cross carmellose sodium, and magnesium stearate) was evaluated by binary mixture approach, using FTIR. According to the SeDeM-ODT expert system, granules were characterized for various parameters related to flow, compressibility and disintegration behavior and Index of Good Compressibility and Buccodispersibility (IGCB) was calculated. The process variables resulting in highest IGCB value were considered as optimum. Ribavirin was found compatible with all the excipients used in the study and characteristics peaks were present in FTIR spectra after subjecting to stress conditions (75% relative humidity at 45?±?5?°C) for 30?days. Both Ribavirin powder and Ribavirin containing powder blend had poor flow and compressibility while disintegration behavior was good due to higher water solubility. Screw speed of 35?rpm and roller speed at 12?rpm resulted in granules with acceptable characteristics. The IGCB value (5.63) of the granules was highest of all, indicating its better characteristics. SeDeM-ODT expert system presents a more practical picture of the granules and also predicts the mechanical strength and disintegration behavior of the tablets prepared from the granules. By proper optimization of screw and roller speed, efficiency of the process can be improved.     

嘌呤核苷磷酸化酶不同表达方式对发酵利巴韦林的影响

嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase,由pup G基因编码)是合成利巴韦林的关键酶,本研究考察该酶的质粒过表达和基因组整合表达对鸟苷生产菌解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)TA208发酵生产利巴韦林的影响。以B.amyloliquefaciens TA208为出发菌株,分别利用基因过表达和无标记整合技术,成功构建了B.amyloliquefaciens TA2081和TA2082。通过实时定量PCR测定这3株菌pup G基因的转录水平,结果表明与B.amyloliquefaciens TA208相比,TA2081和TA2082的转录水平均有提高,但TA2081提高的更为显著;通过测定PNPase活性发现,B.amyloliquefaciens TA2081和TA2082的PNPase活力分别为出发菌株TA208的2倍和1.30倍。7.5 L分批补料发酵实验表明,与出发菌B.amyloliquefaciens TA208相比,工程菌TA2081鸟苷到利巴韦林的摩尔转化率从20.41%提高到98.63%,TA2082的转化率从20.41%提高到40.95%。综上所述,增加pup G的表达量能提高利巴韦林的产量,本研究为利巴韦林生产菌的代谢工程改造提供了理论依据和技术指导。     

5'-脱氧-5'-乙酰硫代核苷的一步法合成

一种合成标题化合物的新方法.分别以腺苷、肌苷、尿苷、利巴韦林和硫代乙酸为原料,通过Mitsunobu反应一步法合成了4种标题化合物,收率分别为68.4%,69.8%,73.4%,65.0%,并根据该反应对核苷5'-OH具有较高选择性这一结果提出了该反应可能的机理,所有产物结构均通过1HNMR、ESI-MS确证.     

液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中利巴韦林及其代谢物总残留的不确定度评定

为提高鸡蛋食品安全检测结果准确性,建立了一种液相色谱串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)测定鸡蛋中的利巴韦林及其代谢物总残留量的不确定度数学模型。依据SN/T 4519-2016《出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定》中的方法,对整个检测过程进行了不确定度评定。不确定度分量主要来源有测量的重复性、回收率、样品的称量、样品前处理稀释和定容、标准溶液配制、标准曲线拟合及仪器测定引入。经评定鸡蛋中利巴韦林及其代谢物总残留量结果为X=(9.94±0.88)μg/kg, k=2; 其中标准曲线拟合过程中引入的不确定度分量影响最大。     

可溶性人类白细胞抗原G对丙型肝炎初治患者标准化治疗疗效的影响

目的: 探讨可溶性人类白细胞抗原G（sHLA-G）对慢性丙型肝炎（CHC）患者聚乙二醇干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗疗效的影响。方法: 选择2013年10月至2015年10月就诊的63例CHC患者,分别采用基因芯片法、RT-PCR法和ELISA方法检测丙型肝炎病毒（HCV）基因型、HCV RNA和sHLA-G。所有患者接受聚乙二醇干扰素皮下注射,联合口服利巴韦林抗病毒治疗。分析获得持续病毒学应答（SVR）的影响因素。结果: SVR组女性和非基因1型比例均显著高于非持续病毒学应答（NSVR）组（女性：70.59% vs. 44.83%,χ2=4.285;非基因1型：82.76% vs. 55.88%,χ2=5.217,P均<0.05）,其余基线指标均无统计学差异（P均>0.05）。NSVR组患者治疗前血浆sHLA-G水平显著高于SVR组［1.85(1.49-16.00) ng/L vs. 1.53(1.36-2.80) ng/L;U=329.00,P<0.05］。经过多变量logistic回归分析,发现sHLA-G和HCV基因型是与治疗结局相关的独立影响因子,Exp(B)（95%CI）分别为0.922（0.868-0.978）、14.204（1.898-106.289）。结论: sHLA-G对丙型肝炎初治患者标准化治疗疗效有重要影响,特别是低水平者更容易获得持续病毒学应答。     

三氮唑核苷合成研究进展

三氮唑核苷 (Ribavirin)是一种良好的广谱抗病毒药 ,并且该类化合物的应用日趋广泛。系统介绍了三氮唑核苷的合成方法。卤代糖法是以 1,2 ,4-三氮唑 -3 -羧酸甲酯 (2 )与六甲基二硅烷进行硅烷化反应后 ,与 2 ,3 ,5-O-三乙酰基 -β-D-呋喃核糖溴化物 (1)在乙腈中反应制得化合物 (3 ) ,然后用氨 -甲醇溶液氨解制得三氮唑核苷 (4) ;核苷酸法是以核苷酸为原料经水解制得的核苷在醋酸 -冰醋酸体系中反应制得 1,2 ,3 ,5-O-四乙酰基 -β-D-呋喃核糖 (5) ,再和 (2 )在催化剂存在下缩合得化合物 (3 ) ,然后氨解制得 (4) ;肌苷法是以肌苷为原料制得(5) ,再和 (2 )在催化剂存在下缩合得化合物 (3 ) ,氨解制得 (4) ;腺苷法是以腺苷为原料 ,阳离子交换树脂做催化剂 ,乙酰化制得化合物 (5) ,再经缩合、氨解制得 (4)