无性型虫草菌株qsun-1的生长特性

利用组织分离法,从青藏高原野外采集的新鲜的冬虫夏草子座中分离得到无性型虫草菌株qsun-1,并研究了该菌株的菌落形态及显微结构.确定无性型虫草菌株qsun-1最佳培养条件为:生长温度15～18℃;培养基的构成为蔗糖2％,蛋白胨2％,MgSO4 0.1％,KH2 PO4 0.2％.     

添加不同碳氮源对蛹虫草子实体生长的影响

以蛹虫草CM2品种为供试菌株,蛹虫草子实体的产量及虫草素含量为指标,以麦粒为基础培养基,添加5种不同碳氮源,观察对蛹虫草菌丝及子实体生长的影响.结果表明,在5种碳氮源中蔗糖和蛋白胨最有利于蛹虫草子实体生长,子实体在100g培养料中产量分别为57g和55.67g.虫草素含量分别高达15.76mg/g和14.32mg/g.     

1H NMR代谢指纹图谱结合化学计量学快速检测蛹虫草掺假

目的：采用氢核磁共振(1H nuclear magnetic resonance,1H NMR)结合正交偏最小二乘法(Orthogonal partial least squares,OPLS)建立对蛹虫草中金针菇、杏鲍菇和香菇掺假的快速鉴别方法。方法：主成分分析得分图显示,不同类型的掺假样品并不能完全分离。采用两步法进一步提高模型的鉴别能力,首先对纯蛹虫草和掺假蛹虫草进行OPLS-DA分析,模型显示真假蛹虫草分类良好,两类样品存在明显区别。然后对所有20% (w/w)掺假蛹虫草进行了O2PLS-DA模型分析,通过分别由28个和12个样本组成的训练和测试集来检查鉴别能力的准确性。结果：模型整体拟合优度为R2X = 75.2%, R2Y = 92.3%,整体交叉验证系数Q2 = 89.7%,掺假物金针菇、杏鲍菇和香菇能够被准确辨别。结论：1H NMR代谢指纹图谱结合化学计量学,对于真伪蛹虫草及掺假类型能够有效鉴别,可用于大批量商业筛选。     

响应面法优化蛹虫草固体栽培工艺

应用Plackett-Burman、Box-Behnken设计实验结合期望函数优化蛹虫草固体栽培培养基.以蛹虫草子实体生长周期、子实体产量、多糖、蛋白、腺苷和甘露醇的含量作为考察指标,采用期望函数将多个考察指标综合为一个考察指标--期望值D,对蛹虫草诱变菌株N165固体培养的营养液成分进行优化.蛹虫草诱变菌株N165固体培养基的营养液的最佳配方为:酵母浸粉10.33g/L,蔗糖27.24g/L,KH2PO45.60g/L,蛋白胨5.00g/L,MgSO4·7H2O1.00g/L,ZnCl20.011g/L,维生素B1 0.05g/L和(NH4)2SO421.00g/L.     

中草药提取液对冬虫夏草深层培养的影响

试验了11种中草药提取液对冬虫夏草液体培养生物量和多糖产量的影响。结果得出：这11种中草药水提液除川牛膝、黄精、山药对冬虫夏草的生物量有抑制作用外，其它几种中草药均有促进作用，增幅范围在0．007-0．94倍。该11种中草药均对冬虫夏草胞外多糖的产量有促进作用，其胞外多糖增幅在0．09～0．88倍；中药醇提液除川牛膝、石斛、黄芪对冬虫夏草的生物量有抑制作用外，其它几种中药促进作用的增幅在0．16～0．67倍。除山药和黄芪外均能提高冬虫夏草胞外多糖的产量，它的增幅在0．03～0．73倍。通过比较，最后实验了当归、党参、枸杞子、川牛膝的最适添加量，前三者在150g／L，后者在50g／L。在此条件下，生物量最大分别可达26．13、22．14、23．55、15．83g／L，胞外多糖的最大产量分别达到7160．2、7580．3、6830．5、6583．6g／L。以上11种中药对冬虫夏草胞内多糖也有一定的促进作用，但增幅不大。     

蛹虫草固态发酵联产多糖和纤溶酶的工艺优化

以玉米粉作为主要原料,利用蛹虫草固态发酵同时生产多糖和纤溶酶。以多糖含量和纤溶酶活力为指标,通过单因素和正交试验优化了蛹虫草固态发酵培养基和培养条件。结果表明:培养基由玉米粉和麸皮构成,比例为18:2（g/g）,料水比例1:1（m/V）,接入6%（V/m）蛹虫草液体菌种,23℃发酵时间3 d。在优化条件下获得浸提液中的胞外多糖含量为3.23 mg/mL,纤溶酶在血纤维蛋白平板上形成的溶圈面积为169.34 mm2。研究结果为生产蛹虫草功能食品基料提供了基础。     

蛹虫草蛋白质的碱法提取工艺

以蛹虫草子实体为原料,通过碱法提取蛹虫草的蛋白质,以蛋白质的提取率作为提取工艺的衡量指标。在单因素实验的基础上,通过Box-Behnken模型对提取工艺进行响应曲面优化,在提取温度为60℃的条件下,确定最佳提取条件为:提取时间128 min,料液比为1∶16.2(g∶mL),NaOH溶液的浓度0.14 mol/L。在此条件下验证蛋白质的得率为88.92 mg/g与预测值88.19 mg/g接近。     

蛹虫草液体种制备及发酵生产菌丝体和虫草菌素工艺优化

为获得蛹虫草液体种制备和液体发酵生产菌丝体和虫草菌素的最佳工艺,以蛹草拟青霉Peacilomyces militarisBCEC07菌株为菌种,通过对接种量(孢子浓度)的考察,探索不同孢子浓度对蛹虫草液体母种制作效果的影响;通过单因素和正交试验,优化生产虫草菌素各营养因子的最佳种类和配比。结果表明:在1.5×1010孢子数的接种量时制作的母种最适合用于蛹虫草液体发酵产菌丝体和虫草菌素;蔗糖、蛋白胨、MgSO4.7H2O、K2HPO4和NAA是最适合的碳源、氮源、无机盐及生长因子;工艺优化后得出蛹虫草液体发酵产菌丝体的最佳配方为30g/L蔗糖、25g/L蛋白胨、1.5g/L KH2PO4、0.5g/L MgSO4.7H2O和4.0mg/L NAA;产虫草菌素的最佳配方为:30g/L蔗糖、25g/L蛋白胨、1.5g/L KH2PO4、0.5g/L MgSO4.7H2O和3.0mg/L NAA。优化后生物量和虫草菌素总产量分别提高了43.00%(达31.60g/L)和31.60%(达645.12mg/L)。为进一步提高蛹虫草菌丝体及虫草菌素的单位产量提供参考。     

野生虫草无性型分离株分子鉴定及遗传多样性的研究

虫草具有较高的食用与药用价值,本文以19株野生虫草分离株为研究材料,利用ITS引物进行PCR扩增、测序,并从Genbank上下载虫草属相关序列,构建系统发育树,并对19株虫草无性型分离物进行ERIC-PCR扩增,同时还检测了上述无性分离物发酵液中虫草素的含量。系统发育分析表明在分子水平上19株虫草的无性型分离菌株,都为蛹虫草(Cordyceps militaris)。与高雄山虫草(C.takaomontana)、蝉花(C.cicadae)、古尼虫草(C.gunnii)以及冬虫夏草(C.sinensis)平均遗传距离分别为0.1269、0.1228、0.2251和0.2354,在遗传距离上,与高雄山虫草和蝉花较近,与冬虫夏草较远。ERIC-PCR相似系数在0.8水平上,可以将19个蛹虫草菌株分为3组,相似系数在0.9水平上19株蛹虫草菌种可以分为8组。对蛹虫草发酵液中虫草素含量检测发现,所有蛹虫草无性型分离物发酵液都含有虫草素,最高的可达到126.33 mg/L,为现有的蛹虫草生产菌株JD的119倍。