莴苣1-FFT基因的克隆及其功能分析

利用反转录PCR技术和cDNA末端快速扩增(RACE)技术从莴苣中分离出1-FFT(果聚糖:果聚糖1-果糖基转移酶)候选全长cDNA,序列分析表明该基因的开放阅读框中具有β-果糖苷酶单元(蔗糖结合框)、RDP域和EC域三个活性中心域.Southern杂交分析表明该基因在莴苣基因组中以单拷贝形式存在.利用农杆菌介导的叶盘转化法将该基因转入无1-FFT基因的烟草细胞,获得了转基因植株.体外酶反应证实转基因叶片提取物中具有1-FFT活性,该基因编码1-FFT.     

双孢蘑菇耐热相关基因028-1的克隆与序列分析

根据双孢蘑菇耐热相关基因片段028-1400的cDNA序列设计并合成引物，应用cDNA末端快速扩增（RACE）方法获得该基因的5′端cDNA片段028-11200。以上述两个片段为模板，经PCR扩增获得该基因的全长cDNA序列，并对其进行了克隆、鉴定、测序与分析。该序列全长1．37Kb，在GenBank中未发现明显的同源序列。该基因序列在GenBank上的登录号为DQ235473。     

奶山羊青春期乳腺发育重要基因RelA的全长克隆

从本实验室已建立的关中奶山羊7个时期乳腺Long-SAGE标签库中筛选出在青春期高表达的RelA基因,用RACE方法克隆并获得关中奶山羊RelA基因的全长,将全长序列与NCBI GenBank中人(H.sapiens)和牛(Bos taurus)数据库进行同源性比对,证实用所选EST标签引物克隆出的基因全长是奶山羊RelA基因.     

利用SMART RACE克隆STGA3 cDNA的5'末端

阐述了SMART RACE的原理,克隆了草莓贝壳杉烯氧化酶基因（STGA3）5’端未知序列。所得到的STGA3 cDNA的5’末端共有1474bp,其中非编码区共34bp,编码区1440bp,编码氨基酸480个,此序列在NCBI的注册号为：AY462247。它与已克隆到的同源基因拟南芥GA3和南瓜CYPT 01A1之间的同源性分别为56．9％和59．2%。     

大黄鱼类IV型抗冻蛋白基因的克隆、表达及功能研究

目的 研究大黄鱼类IV型抗冻蛋白基因编码产物的功能.方法 从大黄鱼肝脏SSH cDNA文库筛选到的类似极地鱼类IV型抗冻蛋白的EST序列出发,用RACE方法克隆IV型抗冻蛋白基凶全长cDNA,RT-PCR分析此基因在大黄鱼不同组织内的表达.构建原核表达载体pGEX-4T-Lycarp并表达蛋白质,亲和层析纯化GST融合蛋白,分析它的体外细菌抗冻保护作用.结果 大黄鱼类IV型抗冻蛋白基因cDNA全长664 bp,包含372 bp开放阅读框,编码124个氨基酸,经Signal P 3.0软件预测其N端前20位氨基酸为信号肽,氨基酸序列与长角杜夫鱼IV型抗冻蛋白同源性高达52%:RT-PCR分析表明其mRNA仅在肝脏表达;重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,初步纯化后分析体外细菌抗冻保护作用表明,融合蛋白抗冻活性并不明显.结论 大黄鱼类IV型抗冻蛋白不具有显著的抗冻活性,这与大黄鱼不能在低温下生存吻合.     

真菌产人参皂苷葡萄糖苷酶基因的调取

根据已知的人参皂苷糖苷酶(GluGF)的N端氨基酸序列设计简并引物,从Absidia Sp.R84g菌株的总RNA出发,应用RACE技术,快速扩增测序得到cDNA3′末端与cDNA5′末端的未知序列,利用扩增测序所得到的cDNA5′末端和cDNA3′末端的序列设计引物,进行二次RT-PCR扩增并测序得到GluGF基因的...     

普通烟草钙依赖蛋白激酶NtCDPK15的基因克隆及表达分析

钙依赖蛋白激酶(CDPK)对Ca²⁺信号转导通路下游元件的调控具有重要作用。本实验采用同源克隆技术从普通烟草中分离得到1 个CDPK 基因,命名为NtCDPK15(GenBank 登录号为JN662020),cDNA 全长为1963 bp,ORF 大小为1569 bp,编码522 个氨基酸。多序列比对结果表明,NtCDPK15 的编码产物具有典型的CDPK 保守序列,C 末端调控区有4个EF 手性结构。系统进化树分析显示,NtCDPK15 可能来源于绒毛状烟草,预测NtCDPK15 与NtCDPK1这对旁系同源基因在功能上可能非常保守。实时荧光定量PCR 分析结果表明,NtCDPK15 在根和叶中的表达量显著高于茎中的表达量,但经盐胁迫诱导后NtCDPK15 在茎中的表达量显著增加,同时,盐胁迫还使基因在叶中的表达量显著上调,ABA 胁迫可诱导基因在根中的表达,而干旱胁迫可使基因在根和叶中的表达量下调,这些结果说明NtCDPK15 在普通烟草中的表达受盐胁迫及ABA 胁迫诱导,但受干旱胁迫抑制。