偏振CARS研究核苷分子振动结构

用偏振灵敏ＣＡＮＳ光谱研究尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶和腺嘌呤四种核苷分子的振动结构。谱的非共振背景被有效地消除，核苷的双键振动模清晰可辨，对每种核苷分子的特征谱线进行了标识，作为在生物分子中识别它们的标志。     

泰山虫草菌丝体与冬虫夏草有效成分的TLCS分析

以腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、虫草素及次黄嘌呤为指标,测定泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草中相应成分的含量,探索泰山虫草代替天然冬虫夏草开发药物或保健食品的可能性。采用80%乙醇超声提取,在GF254硅胶板上点样后,以薄层色谱扫描法(TLCS)测定上述各种成分的含量。首次证明泰山虫草菌丝体核苷类及次黄嘌呤等有效成分含量明显高于冬虫夏草。其腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤含量分别是冬虫夏草的8.25倍、3.76倍、11.8倍和1.55倍。2种虫草中有效成分的含量均表现为尿苷>次黄嘌呤核苷>腺苷>次黄嘌呤>虫草素。说明泰山虫草可以作为冬虫夏草代用品进行综合开发利用。TLCS法简捷快速,重现性、稳定性良好,能有效地对虫草中的有效成分进行定性定量分析。     

从RNA酶解液中分离5'-尿苷酸

采用2根强酸性阳离子交换柱、1根弱碱性阴离子交换柱和1根强碱性阴离子交换柱进行4柱串联,可以从RNA酶解液中分离得到5'-尿苷酸,而不混有其它核苷酸,并对离子交换树脂种类、树脂量、洗脱剂等作了进一步研究.结果表明,采用4柱串联分离5'-尿苷酸,其总收率达到92.1％、结晶纯度达到86％以上.     

构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D

利用拟南芥（Arabidopsis thaliana）蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖（uridine diphosphate glucose,UDPG）再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D（rebaudioside D,RD）合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因,将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105,随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21（DE3）构建双酶共表达工程菌。在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸（uridine diphosphate,UDP）的条件下,以上述双酶共表达工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A（RA）获得的底物摩尔转化率大于80%,RD产量达到930?mg/L。随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21（DE3）工程菌。用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同。采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化,结果显示以粗酶催化可简化催化体系,并可将细胞催化体系所需高质量浓度蔗糖用量降至质量浓度5 g/100 mL,同时在不添加外源UDPG的条件下实现RD的高效生物催化,RA底物摩尔转化率达到93%,RD产量约为1?051?mg/L。     

基于尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1解毒通路探讨枸杞汁对邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯代谢的干预作用

目的:通过大鼠毒性干预实验观察枸杞汁对邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)染毒大鼠肝脏中尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1(uridine diphosphate glucuronosyltransferase 1,UGT1)活性及代谢解毒的影响,探讨枸杞汁对DEHP代谢的干预效果。方法:60只雄性大鼠随机分为对照组、DEHP组和枸杞汁干预组,每组20只,DEHP组和干预组在DEHP一次染毒(3 000 mg/kg mb)后连续7 d分别灌胃生理盐水和枸杞汁,对照组则给予同等体积的芝麻油或生理盐水,期间每天收集大鼠24 h尿液。在染毒1、3、5、7 d后各组分别随机处死5只。采用试剂盒检测肝脏UGT1的活力,高效液相色谱法检测血清中的邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(mono-(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)以及尿液MEHP和邻苯二甲酸(phthalic acid,PA)含量。结果:枸杞汁干预组大鼠第5天UGT1活性显著高于DEHP组和对照组(P0.05),且相对于DEHP组血清中MEHP含量减少而尿液中MEHP和PA含量增加。结论:枸杞汁可能通过提高UGT1活力促进了DEHP的代谢与排泄,发挥了解毒效应,将来可能作为一种预防或对抗邻苯二甲酸酯类物质或其他有毒化学物潜在危害的保健药材或功能食品用于人群的健康防护。     

嘧啶核苷高产菌的代谢控制育种策略

选育嘧啶核苷高产菌是实现发酵法生产胞苷、尿苷的前提。文中分析了枯草芽孢杆菌中嘧啶核苷的生物合成途径及其代谢机制,提出嘧啶核苷高产菌的育种策略:以能大量积累肌苷的枯草芽孢杆菌为出发菌株,胞苷高产菌株在遗传学上应具备CRDAE-、5FCRr、6AUr、3DUr、HAD-等遗传标记,尿苷高产菌株在遗传学上应具备2TUr、6AUr、UP-等遗传标记。     

5'-脱氧-5'-乙酰硫代核苷的一步法合成

一种合成标题化合物的新方法.分别以腺苷、肌苷、尿苷、利巴韦林和硫代乙酸为原料,通过Mitsunobu反应一步法合成了4种标题化合物,收率分别为68.4%,69.8%,73.4%,65.0%,并根据该反应对核苷5'-OH具有较高选择性这一结果提出了该反应可能的机理,所有产物结构均通过1HNMR、ESI-MS确证.     

重组尿苷磷酸化酶的诱导及其在嘧啶核苷生物合成中的应用

Recombinant Escherichia coli pUDP,which overexpressed uridine phosphorylase(UPase),was constructed.0.5 mmol·L 1lactose had a similar induction effect as the commonly used inducer IPTG during 2.5-5.5 h of cell growth.The lactose-induced UPase was stable at 50°C.Wet cells of pUDP was used as catalyst to biosynthesize 5-fluorouridine from 30 mmol·L 1uridine and 5-fluorouracil in phosphate buffer(pH 7.0)catalyzed at 50°C for 1.5 h and the yield of 5-fluorouridine was higher than 68%.Under the optimum reaction conditions for production of 5-fluorouridine,5-methyluridine and azauridine were synthesized from uridine by pUDP,the yield was 61.7%and 47.2%respectively.Deoxynucleosides were also synthesized by pUDP,but the yield was only about 20%.     

用位相失匹配CARS方法研究尿嘧啶核苷分子的振动结构

在９００～１５００ｃｍ－１波段范围内，检测了尿嘧啶核苷水溶液的ＣＡＲＳ谱。由于采用了位相失匹配方法，从而消除了非共振背景，由此确定了碱基环骨架振动的若干模式，以及Ｃ—Ｈ键和Ｎ—Ｈ键的弯曲振动模式，侧链糖环的弱振动模式也可以在谱中观察到。对失匹配方法的原理及其实验条件给予了讨论。