Isolation and identification of a sulfate reducing bacteria and sequence analysis of its dissimilatory sulfite reductase gene

A sulfate reducing bacteria was isolated from mining sewage of Daqing Oilfield by Hungate anaerobic technology. Physiological-biochemical analysis showed that the strain could utilize polyacrylamide as sole carbon and nitrogen source. The sequence analysis of 16S rDNA illustrated that the similarity of F8 and Desulfovibrio desulfuricans (AF192153) was 99%, and the similarity sequence of dissimilatory sulfite reductase gene (DSR) cloned from the strain and Desulfovibrio desulfuricans (AF273034) was 98%. Their phylogenitic analysis was basically anastomosed, and thus temporarily named as Desulfovibrio desulfuricans F8. The DSR cloned from F8 strain was 2740 bp in length consisting of three ORF, DSRA, DSRB and DSRD as a single operon (DSRABD) regulated by the same operator. DSRA contained typical conservative box of sulfate—sulfite reducing enzyme (SiteⅠand SiteⅡ), which could bind siroheme and [Fe4S4]. DSRB retained a [Fe4S4] binding site, with an uncomplimentary structure for siroheme binding. There was no conservative box in DSRD. Sequence analysis of DSR will provide a theoretical basis for quantitative detection, metabolic pathway modification through gene engineering, and sulfate reducing bacteria (SRB) suppression.     

PCR-核酸薄膜层析法检测创伤弧菌

采用自行建立和优化的PCR-核酸薄膜层析检测体系,对创伤弧菌(Vibriovulnificus)进行检测。采用创伤弧菌的vvhA基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测创伤弧菌的PCR-核酸薄膜层析检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明,所建立起的检测法灵敏度为3.6×102 cfu·mL-1,比PCR-琼脂糖凝胶电泳检测方法高一个数量级。创伤弧菌的PCR-核酸薄膜层析检测方法具有较高灵敏度和良好特异性,操作简单,检测速度快,同时又保护了操作人员的身体健康,具有广阔的推广前景。     

海产品中副溶血弧菌检测方法研究进展

副溶血弧菌是主要的食源性致病菌之一,主要存在于鱼虾贝等海产品中。人们在食用被副溶血弧菌感染的海产品时,容易出现腹泻、呕吐、腹痛等急性肠胃炎症状。本文主要介绍了副溶血弧菌的分子生物学、免疫学等几种快速检测方法,并对未来的发展前景做了展望。      

应用三种方法观察副溶血性弧菌生物被膜

采用三种方法(结晶紫染色法、荧光显微镜法、扫描电镜法)观察了两株分离自食品中的副溶血性弧菌Vp8和Vp32在4℃条件下的生物被膜形成情况,旨在为进一步研究低温条件下副溶血性弧菌生物被膜提供依据。结果表明:三种观察方法所得结果基本一致,Vp8有大量生物被膜形成,而Vp32几乎没有生物被膜形成。结论:在副溶血性弧菌生物被膜的研究中,各种观察方法各有利弊,可根据不同实验室条件或不同研究需求选择合适的观察方法。      

双重DPO-PCR检测副溶血弧菌和霍乱弧菌

根据副溶血弧菌collagenase基因和霍乱弧菌omp W基因,分别设计特异性DPO（dual priming oligonucleotide）引物,建立一种快速检测这两种弧菌的多重DPO-PCR方法,并对其特异性和灵敏度进行了评价。结果显示,设计的DPO引物特异性较强,副溶血弧菌和霍乱弧菌DNA可分别扩增出307 bp与463 bp的特异性条带,检测灵敏度均达0.1 ng/μL。该检测方法对退火温度不敏感。利用该方法对69株疑似弧菌菌株进行鉴定,结果与生理生化鉴定结果一致。该方法特异性强、灵敏度高,适合于对食品、水产品等中副溶血弧菌和霍乱弧菌的进行快速筛检。      

发光费氏弧菌对常用色素的生物毒性评价

在探寻出色素与费氏弧菌发光抑制率存在相关性的基础上,初步建立起评价色素生物毒性的方法,并将其应用于果汁中色素产生的综合毒性的检验。结果:色素溶液质量浓度与发光抑制率呈正相关,相关系数在0.8760～0.9873之间,EC50范围在0.72～2.86mg/L之间;果汁中色素质量浓度与发光抑制率同样呈正相关,相关系数在0.9136～0.9951之间,EC50值在1.02～2.96mg/L之间。柠檬黄毒性较小,苋菜红毒性较大。果汁对人工合成色素的生物毒性具有一定影响。色素在果汁中对费氏弧菌发光抑制率随浓度增加而上升的幅度明显大于在水溶液中。本研究为食品急性生物毒性监测的研究提供初步参考。      

海水中溶藻弧菌的分离、鉴定及其耐药性分析

用无菌采样器在上海临港海域采集100份海水,经过增菌培养和选择性分离后,进行3种生理生化鉴定和PCR鉴定,共得到33株溶藻弧菌。采用优化的K-B法测定分离菌株对20种抗生素的耐药性,结果表明:溶藻弧菌对四环素的耐药性最高（100.0%）,其次是氨苄青霉素（97.0%）和羧苄青霉素（93.9%）;对头孢吡肟、安曲南、红霉素、环丙沙星、诺氟沙星和氯霉素敏感。本次分离的溶藻弧菌具有严重的多重耐药性,所有分离菌均对3种及3种以上抗生素多重耐药,同时对6种及6种以上抗生素耐药的有15株（45.5%）,同时对8种及8种以上抗生素耐药的有6株（18.2%）。本次关于溶藻弧菌对抗生素的耐药性分析结果可以为食源性疾病控制提供参考依据,同时为溶藻弧菌的耐药机制的研究奠定理论基础。      

上海市售水产品中副溶血性弧菌耐药性分析

为了解上海市售水产品中副溶血性弧菌的耐药情况,通过药敏纸片扩散法（K-B法）对上海市某水产品市场连续两年监测分离获得的45株副溶血性弧菌进行了25种常用抗生素的药敏实验。结果显示,所有实验菌株都对青霉素G和甲硝唑耐药,有高达90%以上的菌株对帕拉西林、新霉素和卡那霉素耐药,而对利福平、万古霉素、四环素、强力霉素、头孢拉定和土霉素全部敏感;同时发现不同来源的菌株,其耐药谱存在一定程度的差异,菌株多重耐药性与菌株致病因子类型间也存在一定的相关性。因此,应进一步加强水产品中细菌耐药性的监测,并采取更有效措施控制细菌耐药性。      

漳州市夏秋季主要贝类中副溶血性弧菌分布情况分析

调查漳州市售主要贝类中副溶血性弧菌的带菌状况,为消费者提供食品安全风险参考。从漳州市区的8大市场无菌采集花蛤、文蛤和蛏的新鲜样品;用硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基(Thiosulfate citrate bile salts sucrose agar culture medium,TCBS)分离纯化疑似菌落,聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增不耐热溶血素基因(thermolabile hemolysin,tlh)的特异片段;并对分子检测阳性的菌株进行生化鉴定。结果表明,采集到53份花蛤、50份文蛤和42份蛏的样品,经过TCBS筛选分别得到37株、45株和36株疑似菌落,分离率分别为69.8%、90.0%和85.7%;PCR确定副溶血性弧菌阳性率分别为35.8%(19/53)、30.0%(15/50)和54.8%(23/42);革兰氏染色和主要生化实验确定疑似菌均为副溶血性弧菌,符合率达100%。漳州市所售水产品受副溶血性弧菌污染较为严重,市民食用需严格无害化处理,避免不同种类水产品间的交叉污染。      

创伤弧菌的优化培养及快速检测

研究了创伤弧菌优化培养的方案,用以提高该菌的检出率。利用Design-Expert软件中的Box-Behnken中心组合实验原理,设计一组3因素3水平实验,通过响应曲面分析,得到优化培养参数为:含盐量3.65%,pH6.75,培养温度37.00℃,在该条件下培养液的OD595nm为0.520。利用创伤弧菌优化培养条件对市售海产样品进行了培养,并通过聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）对样品进行快速检测,且该菌的检出率高达23.3%。结果表明:应用本实验的优化培养方案、PCR法能快速有效检测水产品中存在的创伤弧菌。