人源血管紧张素转化酶-N结构域基因片段在毕赤酵母中的表达

利用RT-PCR方法从食管癌细胞TE-1中反转出cDNA,PCR扩增得到血管紧张素转化酶N结构域(ACE-N)基因片段,构建pPIC9K-ACE-N表达载体,转化毕赤酵母GSll5,阳性克隆再次电转,并从转化菌株中筛选出多拷贝转化子进行表达.经Ni2+亲和层析柱对表达的蛋白进行纯化,获得的目的蛋白表达量为0.11 g/L,其纯度大于99％.为今后选择性抑制血管紧张素转化酶两个同源结构域的体外研究奠定基础.     

海参水煮液中ACE抑制肽的分离纯化

采用大孔树脂吸附的方法对海参水煮液酶解物多肽进行分离。用30%、60%和90%乙醇水溶液依次洗脱,得到3种多肽。对所得多肽进行ACE抑制活性测定,发现其IC50分别为3.01、0.98和2.88mg/mL。应用Rp18反相硅胶柱和LH-20葡聚糖凝胶柱对活性最高的组分进行ACE抑制肽分离纯化,得到2种多肽单体,ACE抑制活性的IC50分别为0.74和1.77mg/mL。     

白酒酒醅中两种多肽的鉴定及其抗氧化和降血压功能评价

为追溯白酒中多肽的来源,采用超滤、半制备型高效液相色谱等方法对古井贡酒酒醅水溶性提取物中的多肽进行分离纯化,并利用高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱仪对所得多肽进行结构鉴定。在体外水平对多肽的抗氧化功能力和血管紧张素转化酶抑制活性进行测定。结果表明,氨基酸序列分别为Lys-Gly-Pro(KGP)和Val-Pro-Asp(VPD)的2种多肽首次从酒醅中发现,且与标准抗氧化剂Trolox相比,2种多肽均表现出了很强的ABTS自由基清除能力(KGP为1. 12μmol TE/μmol KGP; VPD为1. 36μmol TE/μmol VPD)和氧化自由基吸收能力(KGP为1. 11μmol TE/μmol KGP; VPD为1. 17μmol TE/μmol VPD)。此外,2种多肽也表现出了ACE抑制活性,KGP与VPD的半抑制浓度IC_(50)分别为2. 91和2. 11 mmol/L。该研究为深入挖掘酒醅中生物活性成分进而通过改进蒸馏工艺以提升白酒的健康功能提供了参考。     

超声波辅助酶解法制备豆粕ACE抑制肽的工艺优化

该试验采用超声波辅助酶解法,研究豆粕血管紧张素转化酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽的制备工艺条件,并通过响应面优化单因素试验结果。选用5种蛋白酶分别水解豆粕,以ACE抑制率为指标,挑选出最适蛋白酶,结果表明：碱性蛋白酶的ACE抑制率最大,所以选择碱性蛋白酶进行酶解。为提高ACE抑制率,加入超声波预处理,最终确定最佳工艺条件为在超声温度73℃、超声时间39 min、料液比1∶6(g/mL)条件下,再加入7.20%碱性蛋白酶水解3.6 h,在此条件下所制备的豆粕ACE抑制肽的ACE抑制率为61.02%。     

植物源性降压肽作用机制、制备与评价方式及相关研究进展

随着我国经济的发展,高血压患病率呈现高发趋势。药物治疗虽能有效降低血压,但长期服用存在明显副作用。饮食调控是缓解和辅助治疗高血压的重要手段,植物源性降压肽因功效明显且天然、无毒副作用,在世界范围内越来越引起科学家的关注。针对近年来植物源性降压肽在食品领域的研究进展,本文总结了植物源性降压肽的作用机理、制备方法和功效评价方法,进一步重点综述了植物源性食物如小麦、玉米、大豆、大米中降压肽的研究进展,为今后植物源性降压肽的进一步研究提供参考。     

壳聚糖对牡蛎ACE抑制肽的脱腥工艺研究

运用单因素试验优化牡蛎肽的酶解制备工艺,添加0.6%中性蛋白酶在p H7.0、50℃条件下酶解3 h。应用1.0%壳聚糖溶液对优化后的牡蛎酶解液进行絮凝脱腥,4 800 r/min离心15 s即可达到显著的脱腥脱脂和杂质去除效果,固形物回收率80.5%,蛋白回收率79.5%,脂肪去除率达92.4%。得到透明无腥味的牡蛎多肽后,对多肽分子量进行分析,1 000 Da以下的占93.1%,500 Da以下的约占49.7%,对牡蛎多肽的血管紧张素转换酶(angiotensinconverting enzyme,ACE)抑制活性进行研究,IC_(50)为0.475 mg/mL,为开发制备低分子量、高ACE抑制活性的脱腥牡蛎肽提供理论支持。     

虾头酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽的研究

实验以虾头为材料,利用Trypsin、Alcalase 2.4L、Protamex、Flavourzyme、Kojizyme、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、与虾头蛋白酶复合酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽.以ACE抑制率(I值)、氨基酸态氮含量(Cn值)、和TCA可溶性蛋白(短肽)含量(Cp值)为指标对酶解过程进行分析,说明了酶法水解以及不同酶水解生成产物的特点;在此基础上选择控制酶解的方法以达到较高的产量,其中Protamex与虾头蛋白酶复合后效果最好,酶解3h,最大I值达到83.6%(稀释20倍),Cp值于酶解2h达到最大值为6.35mg/mL.     

不同氮量与氮源下烤烟淀粉酶和转化酶活性动态变化

研究结果表明,在烟叶生长成熟过程中,烟叶中淀粉酶活性变化呈双峰曲线,峰值分别出现在叶片功能盛期和成熟期。在烟叶成熟期以前淀粉酶活性与施氮量呈正相关,成熟期则呈负相关。转化酶活性在叶片功能盛期后逐渐降低,随着施氮水平的提高,转化酶活性提高。     

蛋白酶A与纯生啤酒泡沫稳定性及蔗糖转化酶的关系研究

纯生啤酒的泡沫稳定性衰减问题已成为其质量保证的难题.本研究通过外加蛋白酶A、温度梯度热处理研究啤酒残留蛋白酶A酶活和啤酒泡沫的稳定性、蛋白酶A专一抑制剂梯度处理后蛋白酶A残留酶活与对应啤酒泡沫稳定性相关性分析.结果袁明,纯生啤酒的蛋白酶A酶活高低直接决定纯生啤酒的泡沫稳定性.通过戴安离子色谱法检测仪器,建立了检测单位时间内蔗糖的转化效率为基础的蔗糖转化酶酶活的评价方法,该方法可以定量评价啤酒经过温瓶温度处理的强度,为鉴别纯生啤酒提供了定量检测方法.     

猪肺血管紧张素转化酶纯化工艺中试放大研究

采用DEAE离子交换层析-超滤法纯化猪肺血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE),在小试工艺条件的基础上对DEAE离子交换层析进行中试放大。以ACE比活及酶活回收率为指标,考察工艺放大后的纯化效果,并进一步完善纯化工艺条件。结果表明,DEAE离子交换层析柱放大15倍后,最终得到的ACE比活为(1.05±0.04)U/mg,达到电泳级纯,与小试工艺的纯化结果无明显差异,酶活回收率为34.6%±0.3%,高于小试工艺。由此认为,猪肺ACE提取放大纯化工艺是可行的,且可提高纯化效率,该工艺为更大规模的纯化ACE奠定了基础。