纯化肝细胞生长因子对肝癌细胞的增殖刺激作用

利用ＤＥＡＥ纤维素层析、ＦＰＬＣ和ＨＰＬＣ分离，从人胎肝中获得了纯化的特异刺激肝来源细胞ＤＮＡ合成的肝细胞生长因子（ＨＧＦ）。进一步研究表明，ＨＧＦ明显刺激人肝癌细胞的增殖，其刺激活性具有量效关系，并诱导肝癌细胞从Ｇ０／Ｇ１期进入Ｓ期。本研究为探讨ＨＧＦ作用机理建立了模型。     

表达鸡新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的重组腺病毒对肝癌细胞HepG-2的抑制作用

目的探讨表达鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的重组腺病毒Ad-HN对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用。方法应用Ad-HN感染HepG-2细胞,采用MTT法检测Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制作用;AnnexinV染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡;AO/EB染色法和DAPI染色法对Ad-HN感染的肿瘤细胞及细胞核进行形态学观察;底物显色法检测Caspase1、Caspase3、Caspase6和Caspase8活性的变化。结果Ad-HN能够有效抑制HepG-2细胞的增殖,当感染剂量为100MOI,作用时间为48h时,Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制率达峰值(17.20%～35.04%);AnnexinV染色结果显示,Ad-HN感染48h后HepG-2细胞凋亡率为29.39%;Ad-HN感染导致HepG-2细胞呈现细胞浓缩、细胞核皱缩进而碎裂等凋亡特征;Ad-HN感染可显著上调HepG-2细胞的Caspase酶活性。结论Ad-HN能够诱导HepG-2细胞凋亡,并对HepG-2细胞产生抑制效应。     

加速12C6+离子照射诱发人肝癌细胞SMMC-7721的DNA双链断裂

重离子为高传能线密度(LET)辐射,在引起肿瘤细胞失活上有更大的相对生物学效应。DNA的双链断裂在细胞辐射损伤中是极其重要的,其最终导致细胞的失活。本实验研究检测细胞DNA的双链断裂(DSB),以探讨细胞失活的机理。用脉冲场凝胶电泳方法结合溴乙锭染色的荧光扫描技术,定量测定^12C^6 锈导人肝癌细胞SMMC-7721 DNA的DSB剂量效应关系。结果发现,DNA片段释放百分比随吸收剂量的增加而增加。     

Activity of T Cells Stimulated by Hemagglutinin-neuraminidase of Newcastle Disease Virus in vivo

To investigate the stimulated activity of T cells and the anti-tumor properties of hemagglutinin-neurami- nidase(HN) of Newcastle disease virus(NDV) strain Changchun(NDVcc), the expression of HN gene in hepatoma ceils(human HepG-2 and mouse H22 cells) infected with the recombinant adenovirus(Ad-HN) was identified by Western blot analysis and flow cytometry. Sialidase activity of NDVcc HN expressed by Ad-HN was assayed by the periodate-resorcinol method. The in vivo anti-tumor effects of NDVcc HN were evaluated in the H22 solid tumor model. Regional lymph nodes of the mouse model treated with Ad-HN were removed to harvest T lymphocytes and evaluating the specific cytotoxicity of cytotoxic T lymphocyte(CTL) and natural killer(NK) cells by an L-lactate de- hydrogenase(LDH) assay, in the mean time, the secretion of cytokines was analyzed by enzyme linked immunosor- bent assays(ELISA). The results show that NDVcc HN was effectively expressed by Ad-HN in HepG-2 and H22 cells. The sialidase activity assay showed that Ad-HN significantly reduced sialic acid level of the hepatoma cells compared with the cells infected the empty adenovirus vector(Ad-mock). When treated with Ad-HN, the growth of subcutane- ous H22 primary tumors in C57BL/6 mice was suppressed, and the mean mice survival increased. In addition, the treatment of Ad-HN elicited strong NK and CTL responses, and high levels of Th 1 cytokines, such as IL-2 and IFN-y. In conclusion, NDVcc HN effectively elicits T cell-mediate anti-tumor cytotoxicity via sialidase activity and may be a novel strategy for cancer immunotherapy.     

血清酸性铁蛋白测定对肿瘤诊断价值的探讨

本文报道了用人酸性铁蛋白放射免疫分析检测８种肿瘤共２６７例患者血清，发现酸性铁蛋白是较好的肿瘤诊断检测指标，尤其适合于肝癌肿瘤，推荐与ＡＦＰ进行平行试验。诊断试验的评价结果表明，酸性铁蛋白检测对肝癌的特异度和准确度最高、敏感度以肝癌、肺癌最高、胃癌最低；阳性、阴性结果预测值和假阳性率、假阴性率分析均以肝癌组为优；说明酸性铁蛋白对肝癌有一定的特异性，是肝癌较特异的病理学标志物，值得开发和应用。     

绿球藻TC品系提取液促进鼠肝癌细胞的生长

以长期热诱导建立了一种绿球藻(Chlorococcum infusioum)的嗜温品系,简称CTCS。在PBS(磷酸缓冲液)中的CTCS细胞提取液明显促进H_4肝癌细胞株在DME培养基和0.5％FSB(胎牛血清)中的生长。当CTCS提取液蛋白质浓度为12.4微克/毫升时,可使H_4肝癌细胞数量在6天中比对照(不加CTCS提取液)增加12.5倍。     

抗旋毛虫硒蛋白T单克隆抗体的制备及其对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果

目的制备抗旋毛虫与肝癌H7402细胞相关抗原硒蛋白T单克隆抗体,并观察其对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果。方法用纯化的旋毛虫硒蛋白T重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备其单克隆抗体;将肝癌H7402细胞经大腿内侧皮下接种BALB/c裸鼠,1×10^7个细胞/只,采用制备的高效价单抗,按20、50及100μg/只剂量接种裸鼠,隔日1次,共5次,评价单抗对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果。结果成功获得了3株稳定分泌抗旋毛虫硒蛋白T的单抗的细胞株:4D4、4H2及4F1,效价均达1∶204800以上,其中4H2抗体效价最高;20、50及100μg/只剂量组的抑瘤率分别为51.6%、56.2%和80.3%。结论制备的抗旋毛虫与肝癌H7402细胞相关抗原硒蛋白T单克隆抗体对裸鼠体内肝癌H7402细胞具有明显的抑制效果。     

低剂量电离辐射预处理对高剂量辐射诱导的肝癌细胞hepG2细胞周期阻滞的影响

以人肝癌细胞hepG2为研究对象,用流式细胞术测定并分析了低剂量γ射线(5cGy)预照射对高剂量照射(3Gy)诱导的细胞周期阻滞的影响。结果显示：(1)低剂量照射可引起hepG2细胞在G2／M期短暂累积(至照射后4h);(2)低剂量照射促进hepG2细胞的生长;(3)高剂量照射后,hepG2细胞的G2期发生阻滞,而S期只发生短暂延迟;(4)与单纯高剂量照射相比,低剂量照射预处理后4h给予高剂量照射可进一步促进hepG2细胞在G2／M期累积,但预处理后8h给予高剂量可促进细胞通过G2／M期。实验结果表明,低剂量照射预处理对高剂量照射诱导的细胞周期阻滞的影响,取决于两次照射的时间间隔。