微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法检测α_1-蛋白酶抑制剂活性 |
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引用本文: | 周志军,林连珍,方亮,周雁翔,李策生,彭良俊.微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法检测α_1-蛋白酶抑制剂活性[J].粉末涂料与涂装,2011,24(2). |
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作者姓名: | 周志军 林连珍 方亮 周雁翔 李策生 彭良俊 |
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作者单位: | 武汉生物制品研究所血液制剂室,武汉,430060 |
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摘 要: | 目的建立微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法(以下简称微量滴定板法),用于α1-蛋白酶抑制剂(α1-Pro-teinase inhibitor,α1-PI)的活性检测。方法以微量滴定板为载体,将不同量的α1-PI样品与定量的弹性蛋白酶混合,通过适宜的显色底物对剩余的弹性蛋白酶活性进行测定。用酶标仪测定405 nm处A值的变化,分析试验的有效性,并计算α1-PI样品的活性。优化微量滴定板法的实验条件。用BCS凝集分析仪检测α1-PI的活性,确认样品的工作浓度。采用两种方法检测19份样品的α1-PI活性,分析二者的相关性。结果微量滴定板法的最优实验条件为:样品加样体积50μl,标准曲线范围为(2~14)μg/ml;弹性蛋白酶稀释度为1∶1 400,体积100μl;孵育时间15 min;底物稀释度为1∶10,体积50μl;连续监测A405值10 min。微量滴定板法和BCS法检测19份样品的相关系数大于0.99。结论微量滴定板法检测α1-PI活性的时间更短,同一样品不同稀释度之间检测结果的变异率更低,且检测结果与BCS法相关性良好,可替代全自动的BCS法,降低检测成本。
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关 键 词: | α1抗胰蛋白酶 胰弹性蛋白酶 滴定分析法 动态显色法 BCS |
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