天门冬氨酸氨基转移酶连续监测法最适条件的探讨

根据天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化作用的乒乓反应机制,通过二次作图法测定的 L-天门冬氨酸(S_1)和α-酮戊二酸(S_2)的米氏常数分别为(K_m)_(s_1)=7.5mmol/L、(K_m)_(s_2)=0.384mmol/L。当υ_1=0.91V 时,最适条件为;L-天门冬氨酸110mmol/L;α-酮戊二酸12mmol/L;NADH_2 0.25mmol/L;MDH 500U/L;LDH500U/L;Tris 缓冲液80mmol/L,pH8.0±0.1。在此条件下,本法的测定性能为:1)延迟反应时间为30～60s;2)线性反应时间为8min;3)线性测定范围为500U/L(30℃);精确性CV%为0.53～6.7%;相关试验 r=0.9900;95%正常成人 AST 的分布范围为7～30U/L。