| 微滴式数字PCR检测冷冻草莓中GⅠ、GⅡ型诺如病毒 |
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| 引用本文： | 王雪晴,王群,房保海,姜帆,岳志芹,孙涛,梁成珠.微滴式数字PCR检测冷冻草莓中GⅠ、GⅡ型诺如病毒[J].食品工业科技,2020,41(2):89-94. |
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| 作者姓名： | 王雪晴 王群 房保海 姜帆 岳志芹 孙涛 梁成珠 |
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| 作者单位： | 1. 中国海洋大学食品科学与工程学院, 山东青岛 266000;2. 山东青岛海关检验检疫技术中心, 山东青岛 266000 |
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| 基金项目： | 跨境生物产制品中生物危害物活性鉴别及精准检测技术研究(2017YFF0210203)。 |
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| 摘 要： | 目的:建立一种检测冷冻草莓中诺如病毒(GⅠ和GⅡ)的逆转录微滴数字PCR (RT-ddPCR)方法。方法:根据ISO标准选定检测引物,优化反应体系,退火温度,进行了方法学实验,建立了一种快速检测冷冻草莓中GⅠ和GⅡ亚型诺如病毒的新方法。结果:确定了数字PCR检测GⅠ型诺如病毒退火温度为56.5℃,GⅡ型诺如病毒退火温度为58.1℃。RT-ddPCR检测GⅠ质粒标准品标准曲线的R2=0.9947,RT-ddPCR检测GⅡ质粒标准品标准曲线的R2=0.9950,说明该方法具有良好的线性关系。与RT-qPCR灵敏度对比,RT-ddPCR法的灵敏度比RT-qPCR法高一个数量级。在检测范围内,最低检测限低至个位拷贝数。RSD最小为3.8%,表明该实验重复性良好。浓度较低100 copies/μL左右时,RT-ddPCR的重复性不佳。结论:本研究建立的诺如病毒数字PCR法具有特异性强、灵敏度高、检测限低等优点,可用于冷冻草莓中诺如病毒的定量检测。
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| 关 键 词： | 逆转录微滴数字PCR(RT-ddPCR) 诺如病毒 冷冻草莓 |
| 收稿时间： | 2019-04-08 |
Detection of GⅠ,GⅡNorovirus in Frozen Strawberries with Droplet Digital PCR |
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| WANG Xue-qing,WANG Qun,FANG Bao-hai,JIANG Fan,YUE Zhi-qin,SUN Tao,LIANG Cheng-zhu.Detection of GⅠ,GⅡNorovirus in Frozen Strawberries with Droplet Digital PCR[J].Science and Technology of Food Industry,2020,41(2):89-94. |
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| Authors: | WANG Xue-qing WANG Qun FANG Bao-hai JIANG Fan YUE Zhi-qin SUN Tao LIANG Cheng-zhu |
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| Affiliation: | 1. College of Food Science and Technology, Ocean University of China, Qingdao 266000, China;2. Qingdao Customs Inspection and Quarantine Technology Cente, Qingdao 266000, China |
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