鱼源藤黄微球菌三重PCR检测法的建立及耐药性分析

为鉴定感染黄颡鱼菌株fsznc-CL、建立一种快速检测的方法和探讨其耐药特性。采用形态学、理化特性及16S rDNA序列分析方法进行菌株鉴定,人工回归感染研究其致病性。通过对三对特异性引物的反应体系和条件进行优化,建立一种三重PCR检测法并应用到人工感染黄颡鱼的检测中。运用PCR方法扩增耐药基因,用琼脂纸片扩散法检测该菌的药敏特性。结果表明,分离菌株fsznc-CL为藤黄微球菌(Micrococcus luteus),该菌对黄颡鱼具有一定的致病性。三重PCR检测法可准确扩增出藤黄微球菌CBS、Sig和Pol三对目的基因,而其他菌株未扩增出,检测该菌的最低模板浓度为5.822×10^-3 ng/μL,该方法检测带菌样品的阳性率约为83.33%。该菌携带了TEM、aph(3')-Ⅱa、aac(6')-Ⅰ、Sul1和Sul2耐药基因。菌株fsznc-CL对诺氟沙星、苯唑西林、红霉素和呋喃唑酮耐药。本试验建立的三重PCR检测法具有较高的特异性和灵敏度,目前藤黄微球菌对少部分抗生素耐药。