| 摘 要： | 灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP)是灵芝(Ganoderma lucidum)的重要活性物质之一,拥有优异的保健功效,具有较高的研究价值。本实验以菌种G055的GLP为研究对象,对其进行提取纯化并探究其对人皮肤成纤维细胞氧化应激损伤的防护机制。通过Sevag法脱蛋白,采用DEAE-52离子交换层析得到GLP I和GLP II两组分,通过正交试验确定GLP的提取纯化工艺,GLP的最优提取条件为料液比1∶35(m/V)、浸提温度65℃、浸提时间1.5 h,在该条件下进行验证,GLP提取率为(47.70±0.50)%,再现性良好;通过建立以H_2O_2诱导的人皮肤成纤维细胞氧化应激损伤模型,围绕细胞抗氧化酶体系以及Kelch-like ECH-associated protein-1(Keap1)-核因子-E2相关因子(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/antioxidant response element(ARE)信号通路,探究GLP及其组分(GLP I和GLP II)在防护损伤方面的作用效果及机制。损伤前的保护处理和损伤后的修复处理下,GLP及其两组分均能够显著提高细胞的超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平(P0.05),降低活性氧以及脂质过氧化产物丙二醛的水平;GLP激活了Keap1-Nrf2/ARE信号通路的关键调控因子Nrf2,抑制了负调控因子Keap1,进而促进了下游抗氧化酶基因(NQO1和HO-1)的表达。综上,GLP的防护作用与其抗氧化酶水平及Keap1-Nrf2/ARE信号通路密切相关。
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