| 食品检测用肠道侵袭性大肠埃希氏菌标准物质的研制 |
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| 引用本文： | 赵琳娜,王学硕,刘娜,崔生辉,路勇.食品检测用肠道侵袭性大肠埃希氏菌标准物质的研制[J].中国食品卫生杂志,2021,33(6):807-814. |
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| 作者姓名： | 赵琳娜 王学硕 刘娜 崔生辉 路勇 |
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| 作者单位： | 中国食品药品检定研究院,北京 100050 |
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| 基金项目： | 科技部“食品安全关键技术研发”重点专项项目(2018YFC1604303) |
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| 摘 要： | 目的 为满足肠道侵袭性大肠埃希氏菌(enteroinvasive Escherichia coli, EIEC)准确检测的实验室质量控制和能力验证需求,研制具有我国自主知识产权、稳定性良好且具有清晰基因组信息背景的即用型EIEC标准物质。方法 利用二代高通量测序技术对EIEC(CMCC 44840)进行全基因组测序,明确CMCC 44840的种属、血清型、多位点序列分型(MLST)和毒力基因；采用冷冻干燥技术制备活菌含量为103 CFU的EIEC冻干样品；参照CNAS-GL017-2018进行均匀性检验,并采用单因素方差分析对结果进行统计分析；将样品分别于-20 ℃、4 ℃、25 ℃和37 ℃条件下保藏,对其储藏稳定性和运输性进行评价；利用5种食品基质样本进行标准物质的使用效果验证,同时组织3家实验室进行协同标定。结果 CMCC 44840基因组大小为4.96 Mb,GC含量为50.7%,编码基因5 424个,种属鉴定结果为大肠埃希氏菌,(Escherichia coli)血清预测结果为O28ac:H7,MLST为ST311型,携带ipaH、virB、virF等毒力基因；制备的EIEC冻干样品均匀性检验结果F=1.79,符合标准物质均匀性要求；冻干样品在25 ℃和4 ℃下保藏7 d,-20 ℃和4 ℃下保藏60 d,菌含量均保持在103CFU水平,在37 ℃下第3 d菌含量出现下降,低于103CFU水平；添加EIEC冻干样品的20件不同食品基质样品经增菌后均检出EIEC；3家协同标定实验室测定EIEC冻干样品菌含量均为103 CFU,且实验室间无显著性差异(F=0.59)。结论 本研究所制备的EIEC标准物质所用菌株具有清晰的基因组序列信息,均匀性和稳定性均符合要求,适用性良好,能够满足食品检测实验室的质量控制和能力验证的需求。
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| 关 键 词： | 致泻大肠埃希氏菌 肠道侵袭性大肠埃希氏菌 (EIEC) 基因组DNA 标准物质 全基因组测序 毒力基因 |
| 收稿时间： | 2021/9/30 0:00:00 |
Preparation of enteroinvasive Escherichia coli reference materials for food analysis |
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| ZHAO Linn,WANG Xueshuo,LIU N,CUI Shenghui,LU Yong.Preparation of enteroinvasive Escherichia coli reference materials for food analysis[J].Chinese Journal of Food Hygiene,2021,33(6):807-814. |
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| Authors: | ZHAO Linn WANG Xueshuo LIU N CUI Shenghui LU Yong |
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| Affiliation: | National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Diarrheagenic Escherichia coli enteroinvasive Escherichia coli(EIEC) genomic DNA reference material whole genome sequencing virulence gene |
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