仿刺参过氧化氢酶的克隆、表达及纯化 |
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引用本文: | 刘婷婷,齐洪庆,李月,丛丽娜,刘冰南,李成.仿刺参过氧化氢酶的克隆、表达及纯化[J].大连工业大学学报,2019,38(6). |
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作者姓名: | 刘婷婷 齐洪庆 李月 丛丽娜 刘冰南 李成 |
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作者单位: | 大连工业大学生物工程学院,辽宁大连,116034;营口市环境监测中心站,辽宁营口,115000 |
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基金项目: | 国家自然科学基金;国家自然科学基金 |
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摘 要: | 采用RT-PCR技术从仿刺参肠道组织中克隆了过氧化氢酶(Aj-CAT)蛋白的编码序列(CDS)。通过PCR扩增,成功构建了含有Aj-CAT编码序列的重组表达载体pET28c-Aj-CAT。通过热激法获得用于外源表达仿刺参过氧化氢酶蛋白的基因工程菌株BL21(DE3)/pET28c-Aj-CAT。IPTG诱导后,SDS-PAGE检测发现,基因工程菌能够在体外成功地表达融溶状态的仿刺参过氧化氢酶蛋白。利用镍离子亲和层析柱分离纯化,经200 mmol/L咪唑洗脱后,成功得到纯度为97.6%、能够清除过氧化氢的Aj-CAT蛋白。
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关 键 词: | 仿刺参 过氧化氢酶 分离纯化 酶活性 |
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