| α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究 |
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| 作者姓名： | 刁文涛 向凌云 宁萌 王雪妍 马焕 冯菲 陈国参 周伏忠 |
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| 作者单位： | （1.河南省科学院生物研究所有限责任公司，河南 郑州 450008；2.河南省微生物工程重点实验室，河南 郑州 450008） |
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| 基金项目： | 河南省科学院2018重大科技突破专项（18ZP05001）；河南省科学院基本科研业务费（18JK16011）；河南省科学院助推科技成果转化专项（18ZT05017） |
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| 摘 要： | 利用大肠杆菌（Escherichia coli）表达系统，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，成功异源表达了一株链球菌（Streptococcus）S1的α-半乳糖苷酶基因，重组α-半乳糖苷酶经镍柱纯化后，测定其酶学性质。重组α-半乳糖苷酶最适pH值为6.5，最适温度为50 ℃，在碱性环境中（pH 7.5～10.0）及在40 ℃以下温度条件下该酶较为稳定；酶催化动力学结果显示，该酶在最适条件下水解硝基苯-α-D-半乳糖苷（pNPG）的最大水解速率（Vmax）为508.38 μmol/（min·mg），米氏常数（Km）值为1.2 mmol/L；通过薄层层析（TLC）法检测到该重组α-半乳糖苷酶可以高效地水解天然底物蜜二糖、棉籽糖和水苏糖中的α-半乳糖苷键。
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| 关 键 词： | 链球菌 大肠杆菌 异源表达 重组α-半乳糖苷酶 酶学性质 |
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