| PMA-qPCR定量检测VBNC副溶血弧菌方法的建立与优化 |
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| 引用本文： | 彭琳媛,林洪,王静雪.PMA-qPCR定量检测VBNC副溶血弧菌方法的建立与优化[J].食品与发酵工业,2022(1):247-252. |
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| 作者姓名： | 彭琳媛 林洪 王静雪 |
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| 作者单位： | ;1.中国海洋大学食品科学与工程学院 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(2017YFC1600703);财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系资助项目(CARS-47)。 |
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| 摘 要： | 副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）在某些不利于生长的自然和食品加工条件下能够进入活的非可培养（viable but non-culturable, VBNC）状态，普通检测方式极易漏检，因此VBNC细菌检测技术的开发与优化对副溶血弧菌感染防控具有重要意义。基于叠氮溴化丙锭结合荧光定量PCR技术（propidium monoazide quantitative PCR,PMA-qPCR）能够利用活细胞的膜完整性区分活菌和死菌的原理，以副溶血弧菌ATCC 17802为对象，通过探讨PMA-qPCR方法中各项因素对活菌计数结果的影响，优化并建立了VBNC副溶血弧菌的定量检测方法。实验结果表明，当添加PMA质量浓度为15 mg/L,黑暗孵育10 min,再进行强光照射15 min后，死细胞的DNA扩增得到有效抑制，此时提取DNA模板进行qPCR扩增准确性更高，活菌数与qPCR扩增循环数呈现显著性线性相关（R2=0.99）。PMA-qPCR法测定副溶血弧菌活菌数的标准曲线显示该方法检测范围为2.90×101～2.90×10
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| 关 键 词： | 副溶血弧菌 活菌计数 叠氮溴化丙锭 荧光定量PCR 活的非可培养 |
Development and optimization of PMA-qPCR for the quantitative detection of viable but non-culturable Vibrio parahaemolyticus |
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| PENG Linyuan,LIN Hong,WANG Jingxue.Development and optimization of PMA-qPCR for the quantitative detection of viable but non-culturable Vibrio parahaemolyticus[J].Food and Fermentation Industries,2022(1):247-252. |
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| Authors: | PENG Linyuan LIN Hong WANG Jingxue |
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| Affiliation: | (College of Food Science and Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266000,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vibrio parahaemolyticus viable bacteria counting propidium monoazide qPCR viable but non-culturable |
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