IHHNV假病毒核酸标准物质定值研究

传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)感染对虾引起急性传染病，对幼虾危害尤其明显。基于Genbank收录的IHHNV基因序列(AF218266.2),制备了含IHHNV全基因组序列的假病毒标准物质(NIM-RM4062)。针对ORF1基因设计特异性引物探针，建立了IHHNV数字PCR检测方法，进行IHHNV假病毒核酸标准物质的均匀性和稳定性检验。标准物质拷贝数浓度的标准值及扩展不确定度为：(1.22±0.15)×10³ copies/μL(k=2)。利用多种数字PCR平台对标准物质进行定值验证，测量的相对标准偏差(RSD)小于4%,标准物质量值在不同检测平台复现性较好。采用市售IHHNV核酸检测试剂盒进行验证，标准物质量值与荧光定量PCR试剂盒的检测结果具有较好的一致性。