| 穿膜肽介导苦荞金属硫蛋白的表达、纯化及抗氧化损伤作用 |
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| 引用本文： | 何永吉,李云龙,胡俊君,范晓军,李红梅,程 哲.穿膜肽介导苦荞金属硫蛋白的表达、纯化及抗氧化损伤作用[J].中国食品学报,2021,21(10):76-85. |
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| 作者姓名： | 何永吉 李云龙 胡俊君 范晓军 李红梅 程 哲 |
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| 作者单位： | 山西农业大学山西功能食品研究院;特色农产品加工山西省重点实验室;太原理工大学环境科学与工程学院; |
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| 基金项目： | 山西省自然科学基金面上项目（201901D111450）； 山西省重点研发计划项目（201703D321026-1）； 国家现代农业（燕麦荞麦）产业体系建设专项（CARS-07-E2） |
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| 摘 要： | 为研究苦荞金属硫蛋白(FtMT)的生物学功能,制备具有穿膜活性的重组FtMT。采用基因重组技术,分别将FtMT和融合穿膜肽的Tat-FtMT、11R-FtMT编码基因定向克隆至碱性磷酸盐启动子(phoA)分泌型原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)。通过低磷酸盐诱导重组蛋白可溶表达后,经镍柱亲和层析分离纯化,利用SDS-PAGE、Western blot和紫外光谱扫描分析、鉴定。采用电感耦合等离子原子发射光谱仪(ICP-OES)和比色法分析重组FtMT蛋白金属结合特性和羟自由基清除活性。采用免疫荧光法检测穿膜肽介导的FtMT蛋白的穿膜活性,通过MTT细胞增殖试验分析穿膜肽-FtMT融合蛋白对胰岛细胞Ins-1和心肌细胞H9c2在高糖、高脂及缺氧毒性条件下氧化损伤的保护作用。结果表明,获得纯度较高的可溶性FtMT、Tat-FtMT和11R-FtMT重组蛋白,3种重组蛋白具有几乎一致的金属-巯基簇特征吸收峰,具有较强的金属离子结合能力和羟自由基清除活性。穿膜活性试验证实Tat-FtMT和11R-FtMT蛋白较FtMT具有显著的跨膜转运功能(P0.05),外源穿膜肽-FtMT融合蛋白可通过跨膜进入胞内,显著降低Ins-1和H9c2由高糖、高脂以及缺氧毒性导致的氧化损伤(P0.05)。试验成功实现了重组穿膜肽-FtMT融合蛋白的表达,在细胞水平分析其抗氧化损伤作用,为FtMT的食药资源开发、应用奠定基础。
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| 关 键 词： | 苦荞 金属硫蛋白 穿膜肽 抗氧化 糖尿病 |
Expression, Purification and Antioxidative Effects of Recombinant Tartary Buckwheat (Fagopyrum tataricum) Metallothionein Fusion with Cell-Penetrating Peptide |
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