牛产气荚膜梭菌α-ε毒素基因的融合表达及其纯化 |
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引用本文: | 尹辉,赵达,陈为宏,高佳滨,乔波,陈楠楠,胡旭,梁鸿儒,姜东君,王鹤,朱战波.牛产气荚膜梭菌α-ε毒素基因的融合表达及其纯化[J].粉末涂料与涂装,2015(3):261-265. |
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作者姓名: | 尹辉 赵达 陈为宏 高佳滨 乔波 陈楠楠 胡旭 梁鸿儒 姜东君 王鹤 朱战波 |
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作者单位: | 黑龙江八一农垦大学动物科技学院 |
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摘 要: | 目的融合表达产气荚膜梭菌α毒素基因和ε毒素基因的融合基因α-ε,并进行纯化。方法利用PCR技术,从A型产气荚膜梭菌C57-8株基因组DNA中扩增出α毒素基因的部分基因片段,插入到质粒p ET28a-ε上,构建含α-ε融合毒素基因的表达质粒p ET28a-α-ε,转化至E.coli BL21(DE3)plys S感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化后,进行Western blot鉴定。结果重组质粒p ET28a-α-ε经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,与预期的基因序列重合率为99%。表达的重组蛋白相对分子质量约78 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的22.7%,纯度为91.2%,可与小鼠产气荚膜梭菌多抗血清特异性结合,具有良好的反应原性。结论成功构建了重组质粒p ET28a-α-ε,并在E.coli BL21(DE3)plys S中表达了重组α-ε融合蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,可作为预防牛肠毒血症基因工程亚单位疫苗的候选抗原。
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关 键 词: | 产气荚膜梭菌 α毒素基因 ε毒素基因 融合表达 纯化 |
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