| 应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌GapC1的大肠埃希菌 |
| |
| 引用本文： | 杨汐静,张建新,陈晓亭,汤炜,于思淼,刘伟,姚笛,吴志军,于立权,朱战波,崔玉东. 应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌GapC1的大肠埃希菌[J]. 中国生物制品学杂志, 2015, 0(3): 239-244 |
| |
| 作者姓名： | 杨汐静 张建新 陈晓亭 汤炜 于思淼 刘伟 姚笛 吴志军 于立权 朱战波 崔玉东 |
| |
| 作者单位： | 黑龙江八一农垦大学动物科技学院;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(31072120);国家科技支撑现代奶业发展科技工程项目(2012BAD12B03)支持 |
| |
| 摘 要： | 目的应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌Gap C1-150 aa(Gap C1)的大肠埃希菌,为进一步构建大肠埃希菌表面展示重组菌株奠定基础。方法根据Gen Bank中登录的gap C基因序列(GI:30348860)设计引物,以质粒p KD3、p QE30/lpp-omp A-gap C为模板进行PCR扩增、融合,获得融合片段,转化入含p KD46质粒的大肠埃希菌HB101中,利用p KD46编码的RED系统将融合片段重组入基因组中,经氨苄西林(Amp)和氯霉素(Cm)抗性筛选,获得去除p KD46质粒的重组菌(HB101LOG)。对重组菌株进行PCR、Western blot、流式细胞术、荧光显微镜及生物学特性检测。结果 PCR结果显示,重组菌株构建正确;重组大肠埃希菌HB101LOG在菌体表面表达了外源蛋白Gap C1-150 aa;激光共聚焦显微镜观察到HB101LOG可见明显的绿色荧光,HB101未见绿色荧光;重组菌株HB101LOG和HB101的生长曲线符合大肠埃希菌的生长规律。结论应用RED系统成功构建了能展示链球菌Gap C1-150 aa的大肠埃希菌重组菌株。
|
| 关 键 词： | 链球菌 Gap C蛋白 大肠埃希菌 RED同源重组 |
Construction of E. coli displaying streptococcus Gap C1 on its surface by RED homologous recombination |
| |
| YANG Xi-jing;ZHANG Jian-xin;CHEN Xiao-ting;TANG Wei;YU Si-miao;LIU Wei;YAO Di;WU Zhi-jun;YU Li-quan;ZHU Zhan-bo;CUI Yu-dong. Construction of E. coli displaying streptococcus Gap C1 on its surface by RED homologous recombination[J]. Chinese Journal of Bilogicals, 2015, 0(3): 239-244 |
| |
| Authors: | YANG Xi-jing ZHANG Jian-xin CHEN Xiao-ting TANG Wei YU Si-miao LIU Wei YAO Di WU Zhi-jun YU Li-quan ZHU Zhan-bo CUI Yu-dong |
| |
| Affiliation: | YANG Xi-jing;ZHANG Jian-xin;CHEN Xiao-ting;TANG Wei;YU Si-miao;LIU Wei;YAO Di;WU Zhi-jun;YU Li-quan;ZHU Zhan-bo;CUI Yu-dong;College of Animal Science and Technology, Heilongjiang Bayi Agricultural University; |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
