| 截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白在昆虫细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 刘景会,刘玉林,褚迪,车薇薇. 截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白在昆虫细胞中的表达[J]. 中国生物制品学杂志, 2015, 0(3): 233-238,244 |
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| 作者姓名： | 刘景会 刘玉林 褚迪 车薇薇 |
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| 作者单位： | 长春生物制品研究所有限责任公司细胞因子室;吉林大学第二医院呼吸与危重症医学科 |
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| 摘 要： | 目的利用昆虫细胞杆状病毒表达系统构建含截短型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)58型主要衣壳蛋白L1基因的重组杆状病毒,并在Sf9细胞中表达。方法从NCBI中获得HPV 58 L1基因序列,应用Clustal X2软件进行序列比对后,确定相对保守的目的基因序列;人工合成HPV 58 L1基因片段,PCR法获得截短型HPV58 L1-1基因,克隆至p Fast Bac-1载体中,构建重组供体质粒p FB-HPV 58 L1-1,转化大肠埃希菌DH10Bac,构建重组Bacmid-HPV 58 L1-1,转染Sf9细胞,获得第1代(P1)重组杆状病毒BV-HPV 58 L1-1,扩增后采用快速滴定法测定病毒滴度;将重组杆状病毒感染Sf9细胞,表达HPV 58 L1-1蛋白,并进行Western blot分析和透射电镜观察。结果Bacmid-HPV 58 L1-1经PCR及测序鉴定构建正确;P2重组杆状病毒的滴度可达1.0×108 pfu/ml;HPV 58 L1-1在Sf9昆虫细胞中的表达产物经Western blot检测,可见相对分子质量约55 000的特异性反应条带,电镜观察可见L1蛋白自组装形成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。结论成功在昆虫细胞中表达了HPV 58 L1-1蛋白,并自组装为VLPs,为预防型HPV疫苗的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 人乳头瘤病毒58型 L1蛋白 杆状病毒 Sf9细胞 病毒样颗粒 |
Expression of truncated human papilomavirus 58 L1 protein in insect cells |
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| LIU Jing-hui;LIU Yu-lin;CHU Di;CHE Wei-wei. Expression of truncated human papilomavirus 58 L1 protein in insect cells[J]. Chinese Journal of Bilogicals, 2015, 0(3): 233-238,244 |
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| Authors: | LIU Jing-hui LIU Yu-lin CHU Di CHE Wei-wei |
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| Affiliation: | LIU Jing-hui;LIU Yu-lin;CHU Di;CHE Wei-wei;Changchun Institute of Biological Products Co. Ltd.; |
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