| 增强磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性对于谷氨酸棒状杆菌积累α-酮戊二酸的影响 |
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| 引用本文： | 孙兰超,刘涛,赵岩,谢希贤,徐庆阳,张成林,陈宁.增强磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性对于谷氨酸棒状杆菌积累α-酮戊二酸的影响[J].现代食品科技,2016,32(6):63-69. |
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| 作者姓名： | 孙兰超 刘涛 赵岩 谢希贤 徐庆阳 张成林 陈宁 |
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| 作者单位： | （代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室，天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室，天津科技大学生物工程学院,天津300457）,（代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室，天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室，天津科技大学生物工程学院,天津300457）,（代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室，天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室，天津科技大学生物工程学院,天津300457）,（代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室，天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室，天津科技大学生物工程学院,天津300457）,（代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室，天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室，天津科技大学生物工程学院,天津300457）,（代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室，天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室，天津科技大学生物工程学院,天津300457）,（代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室，天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室，天津科技大学生物工程学院,天津300457） |
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| 基金项目： | 天津市教委科研究计划项目（项目编号：20120630） |
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| 摘 要： | α-酮戊二酸（α-ketoglutarate，α-KG）作为一种二元短链羧酸，是谷氨酸、琥珀酸等化合物的重要前体，在转氨基等反应中也起着重要作用。磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶是谷氨酸棒杆菌中催化合成TCA循环中重要代谢物草酰乙酸的关键酶，本文以谷氨酸棒状杆菌GDK-10为出发菌株，通过同源重组技术对磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶编码基因pepc进行以下改造：将GDK-10的Ppepc启动子替换为强启动子Ptuf，获得菌株GDK-11；构建pepc双拷贝菌株GDK-12；对GDK-10基因组pepc进行定点突变(N917G)，获得菌株GDK-13。实时荧光定量PCR检测表明，菌株GDK-11和GDK-12的pepc表达量是GDK-10的47.05倍和2.03倍。发酵结果表明，菌株GDK-11和GDK-12的产酸量相对于出发菌株分别下降45.50%和13.90%，但GDK-12的单位菌体产量较GDK-10提高38.59%。菌株GDK-13产酸量无明显变化，但其单位菌体产量和糖酸转化率分别提高21.14%和8.97%。可见，适量过量表达pepc和将GDK-10基因组pepc替换为解除天冬氨酸反馈抑制的pepc (N917G)均可提高α-KG的单位菌体产量且后者可显著提高糖酸转化率。本研究结果可对α-KG的基因工程改造奠定基础。
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| 关 键 词： | 谷氨酸棒状杆菌 α-酮戊二酸 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 同源重组 |
| 收稿时间： | 2015/7/31 0:00:00 |
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