金黄色葡萄球菌肠毒素P双抗夹心酶联免疫检测方法研究

本研究目的是建立一种快速检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素 SEP 的双抗夹心酶联免疫方法。通过对单克隆抗体和抗血清质量浓度、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 Ig G（Ig G/HRP）最佳稀释度、不同种类包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺（TMB）显色时间等条件进行优化；并采用灵敏度、批内和批间变异和加标回收率等对方法进行评价。结果表明：该方法中抗 SEP 单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为 3.28 μg/m L，抗 SEI 兔血清的质量浓度为 3.14 μg/m L，酶标二抗稀释度 1:3000，1×磷酸缓冲盐溶液（p H 7.4）为最佳包被缓冲液，封闭时间为 1 h，抗原孵育时间为 90 min，酶标二抗反应时间为 30 min，TMB 显色时间 15 min。该方法回归方程为 y=0.0313x+0.0262，R2=0.9946。灵敏度为 1.80 μg/m L，精密度批内变异低于 6%，批间变异低于 15%，对 LB 肉汤、牛肉糜和熟米饭回收率达 90%以上。