小鼠肝脏羧酸酯酶的cDNA克隆、表达及应用

从小鼠肝脏中克隆羧酸酯酶（CES）基因家族成员Ces1f的cDNA，在大肠杆菌中表达，并验证重组酶对农药的作用。采用RT-PCR克隆Ces1f cDNA，与pUCm-T载体连接测序后，亚克隆至表达载体pET-32a，构建重组表达质粒pET-32a-Ces1f，转化到宿主菌BL21（DE3）后经IPTG诱导表达，经SDS-PAGE鉴定，采用Ni柱对表达产物进行纯化并测重组CES的酶比活，利用HPLC验证重组酶对不同农药的作用。结果显示：成功获得纯化的77kDa的重组CES蛋白，其酶液的比活为55.37U/mg，HPLC检测发现重组CES对西维因、呋喃丹及甲基对硫磷等具有降解作用。成功表达重组CES，其对农药具有降解作用，为环境中农药残留的降解奠定了基础。