重组金黄色葡萄球菌肠毒素B的原核表达、纯化及其免疫原性 |
| |
作者姓名: | 韩慧 史伯昌 李欣昱 李华斌 田崇瑜 闫芳 石艳春 郑源强 赵忠鹏 |
| |
作者单位: | 1. 内蒙古医科大学内蒙古自治区分子生物学重点实验室;2. 安徽医科大学基础医学院;3. 山西农业大学动物医学学院 |
| |
基金项目: | 国家重点研发计划(2019SWAQ05-3-5,2019YFC1200604);;国家自然科学基金(81871252,81660272);;内蒙古自治区自然科学基金(2017ZD08); |
| |
摘 要: | 目的 对金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)基因定点突变体进行克隆、表达及纯化,并检测其免疫原性,为研制马抗SEB免疫球蛋白F(ab′)2制品奠定基础。方法 对SEB基因序列进行定点突变和修饰以及偏性密码子优化后,构建重组表达质粒pET-22b-SEB,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组SEB蛋白,经离子交换层析纯化后,HPLC法检测重组SEB蛋白抗原纯度。Western blot法检测重组SEB蛋白抗原免疫活性;将不同浓度重组SEB蛋白抗原腹腔注射BALB/c小鼠,进行致病力、抗体效价、中和抗体活性检测。结果 质粒pET-22b-SEB经双酶切及测序鉴定证明构建正确。纯化的重组SEB蛋白相对分子质量约28 300,纯度大于90%,与天然SEB具有一致的免疫活性,且具有良好的安全性;免疫小鼠抗体效价达1∶81 920,可有效诱导小鼠产生中和抗体。结论 成功对SEB进行了定点突变减毒,经克隆、表达及纯化获得高纯度的重组SEB蛋白抗原,具有良好的免疫原性。
|
关 键 词: | 金黄色葡萄球菌肠毒素B 重组抗原 表达 纯化 免疫原性 |
|