重组金黄色葡萄球菌肠毒素B的原核表达、纯化及其免疫原性

目的 对金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)基因定点突变体进行克隆、表达及纯化，并检测其免疫原性，为研制马抗SEB免疫球蛋白F(ab′)2制品奠定基础。方法 对SEB基因序列进行定点突变和修饰以及偏性密码子优化后，构建重组表达质粒pET-22b-SEB，转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组SEB蛋白，经离子交换层析纯化后，HPLC法检测重组SEB蛋白抗原纯度。Western blot法检测重组SEB蛋白抗原免疫活性；将不同浓度重组SEB蛋白抗原腹腔注射BALB/c小鼠，进行致病力、抗体效价、中和抗体活性检测。结果 质粒pET-22b-SEB经双酶切及测序鉴定证明构建正确。纯化的重组SEB蛋白相对分子质量约28 300，纯度大于90%，与天然SEB具有一致的免疫活性，且具有良好的安全性；免疫小鼠抗体效价达1∶81 920，可有效诱导小鼠产生中和抗体。结论 成功对SEB进行了定点突变减毒，经克隆、表达及纯化获得高纯度的重组SEB蛋白抗原，具有良好的免疫原性。