| 摘 要： | 目的 构建稳定表达绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）和外泌体标志蛋白CD63的BHK-21细胞，获得GFP标记的BHK-21源性的外泌体。方法 将慢病毒表达质粒pCT-CD63-GFP与辅助质粒pVS-VG(Env)和pSPAX(structure)共转染293T细胞，包装重组慢病毒，测定病毒滴度后感染BHK-21细胞，72 h后用嘌呤霉素筛选稳定表达GFP的细胞。Western blot检测BHK-21细胞中CD63的表达量。取其无外泌体血清培养36 h的稳定转染株细胞上清，获得提取物，经Western blot、透射电镜及粒径分析进行鉴定。将提纯的外泌体与受体细胞BHK-21共培养6 h后，观察外泌体在细胞中的摄取情况。通过Transwell试验检测登革病毒（Dengue virus,DENV）感染后细胞外泌体分泌量的变化。结果 筛选出可稳定表达GFP的BHK-21细胞株，并从细胞上清中提取了外泌体。外泌体存在特异性标志蛋白CD63和CD81；透射电镜下，外泌体呈椭圆形，具有双凹圆盘状膜结构，直径在30～200 nm之间；纳米颗粒示踪分析显示...
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