| 重组Flag-pA-Tn5蛋白的原核表达及酶活性鉴定 |
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| 引用本文： | 田家俊,夏燕,李玉玲,任雪,谢金芳,王南平,黄晓飞,曹春雨.重组Flag-pA-Tn5蛋白的原核表达及酶活性鉴定[J].粉末涂料与涂装,2022(9):1055-1059+1064. |
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| 作者姓名： | 田家俊 夏燕 李玉玲 任雪 谢金芳 王南平 黄晓飞 曹春雨 |
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| 作者单位： | 1. 三峡大学医学院肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室;2. 湖北民族大学附属民大医院风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目（81372833）；;湖北省教育厅科学技术研究计划青年人才项目（Q20191901）； |
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| 摘 要： | 目的 构建Flag-葡萄球菌蛋白A(staphylococcal protein A,SPA)与转座酶Tn5基因的重组原核表达质粒p TXB1-Flag-pA-Tn5，在大肠埃希菌中表达、纯化重组Flag-pA-Tn5蛋白，并检测其转座酶活性。方法 合成Flag-pA基因的DNA编码序列，PCR扩增后插入原核表达载体pTXB1-Tn5，构建重组原核表达质粒pTXB1-Flag-pA-Tn5；转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达带有Flag标签的pA-Tn5蛋白，并经几丁质树脂亲和纯化后透析复性；将Flag-p A-Tn5蛋白与含测序引物接头的转座子DNA片段组装成转座体，取不同稀释比例的转座体与人外周血白细胞基因组DNA共孵育，以DNA孵育产物为模板、测序引物进行PCR扩增，鉴定Flag-pA-Tn5转座酶活性。结果 重组原核表达质粒pTXB1-Flag-pA-Tn5经双酶切和测序证明构建正确；表达的重组蛋白产量为211.1μg/mL，能够被几丁质树脂亲和纯化，纯度为84%;Flag-pA-Tn5蛋白与转座子DNA片段组装后，能有效切割人外周血白细胞基因组DNA，并连接测...
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| 关 键 词： | 重组Flag-pA-Tn5转座酶 原核表达 几丁质树脂 酶活性 |
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