产气荚膜梭菌毒素β1的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

目的 原核表达产气荚膜梭菌毒素β1(Clostridium perfringens Beta1 toxin,CPB1)，建立该毒素抗体的间接ELISA检测方法。方法 利用基因工程技术获得cpb1基因，克隆至载体pET32a，构建重组质粒pET32α-cpb1，转化感受态E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白CPB1。以重组蛋白CPB1作为包被抗原，HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗，建立CPB1抗体的间接ELISA检测法。并以CPB1的单克隆抗体McAb 1K19为一抗，优化包被蛋白的包被浓度、一抗稀释度、封闭时间及二抗稀释度，确定方法的临界值，验证方法的特异性、精密性、灵敏性。采用建立的方法检测201份正常牛血清样品及阴性、阳性小鼠血清样品。结果 表达的重组蛋白CPB1相对分子质量约为54 000(CPB1蛋白与硫氧化还原蛋白的融合蛋白)，主要以包涵体形式表达。包被蛋白最佳浓度为10μg/mL，一抗最佳稀释度为1∶16384，最佳封闭时间为120 min，二抗最佳稀释度为1∶1 000。除B和C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C. p...