| 家蚕Argonaute2的表达分析及其结合RNA的初步研究 |
| |
| 引用本文： | 张玉,;洪叶挺,;盛清,;陈健,;于威,;王丹,;吴祥甫,;张耀洲,;聂作明.家蚕Argonaute2的表达分析及其结合RNA的初步研究[J].浙江工程学院学报,2014(6):702-709. |
| |
| 作者姓名： | 张玉 ;洪叶挺 ;盛清 ;陈健 ;于威 ;王丹 ;吴祥甫 ;张耀洲 ;聂作明 |
| |
| 作者单位： | [1]浙江理工大学生命科学学院,杭州310018; [2]浙江理工大学浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018 |
| |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划项目（2011AA100603）;浙江省自然科学基金项目（LY12C06003） |
| |
| 摘 要： | 从家蚕cDNA文库中扩增到家蚕BmAGO2基因完整的ORF序列,通过Lasergene软件分析获得BmAGO2的抗原表位区（命名为Kago2）,构建含Kago2的表达载体,转化大肠杆菌诱导表达,融合蛋白经镍柱亲和层析纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA和Western blotting检测抗血清的效价可达到1∶25 600以上,抗体特异性较好。表达谱分析结果显示,BmAGO2蛋白在家蚕卵期、蛹期、蛾期和五龄幼虫期均表达,但在蛹期表达量要偏低。而在五龄幼虫各组织中BmAGO2蛋白的表达差异较明显,BmAGO2蛋白在头部和表皮中大量表达,丝腺、马氏管和脂肪中也有少量表达,而在血淋巴、气管和中肠中未检测到该蛋白的表达。结合BmAGO2表达谱分析结果,进一步利用其抗体通过免疫共沉淀方法从BmAGO2蛋白表达量高的家蚕头部和表皮中分离出BmAGO2蛋白及结合的RNA,并逆转录成cDNA。以家蚕miRNA潜在的靶基因Bmem4,Bm（spl）-like,Bmemc,Bmmγ,Bmmβ2作为检测基因,荧光定量PCR分析获得的BmAGO2结合RNA,和对照组RNA相比,Bmem4,Bm（spl）-like,Bmemc,Bmmγ,Bmβ2基因在BmAGO2结合RNA中的含量分别富集了3.93、1.31、2.4、1.31、0.97倍。miRNA靶位点分析表明,Bmem4和Bmemc存在多个miRNA结合位点,极有可能是miRNA的靶基因。目前还没有有效的家蚕miRNA靶基因高通量鉴定方法,本实验为家蚕miRNA靶基因的高通量筛选提提供了可靠地实验途径。
|
| 关 键 词： | BmAGO2 表达谱分析 结合RNA 免疫共沉淀 miRNA靶基因 |
Preliminary Study on Expression Analysis of Silkworm Argonaute2 and Its Binding RNA |
| |
| Affiliation: | ZHANG Yu,HONG Ye-ting,SHENG Qing,CHEN Jian,YU Wei,WANG Dan,WU Xiang-fu,ZHANG Yao-zhou,NIE Zuo-ming(a. School of Life Science, b. Zhejiang Provincial Key Laboratory of Silkworm Bioreactor and Biomedicine, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | BmAGO2 expression profiling binding RNA co-immunoprecipitation miRNA target gene |
| 本文献已被 维普 等数据库收录！ |
|
