甘油脱水酶α亚基基因的克隆、表达及纯化 |
| |
作者姓名: | 陈永胜 刘长江 邵敬伟 李长彪 |
| |
作者单位: | [1]内蒙古民族大学农学院,通辽028042 [2]沈阳农业大学食品学院,沈阳110161 [3]福州大学药物生物技术与工程研究所,福州350002 |
| |
摘 要: | 目的克隆甘油脱水酶α亚基基因,构建表达载体,表达并纯化融合蛋白。方法采用PCR技术克隆甘油脱水酶α亚基gldA基因,并将其重组到含组氨酸标签的表达质粒pET-32a(+)中。将重组质粒经热激转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经金属螯合层析柱纯化,并进行Western blot分析及活性检测。结果重组表达质粒pET/gldA经酶切鉴定及序列分析,证明构建正确。转化E.coliBL21(DE3)后,重组蛋白获得可溶性表达,融合蛋白相对分子质量约81000,与预期大小一致。经Western blot分析,纯化蛋白能与6-Histidine抗体产生特异性免疫反应。α亚基经检测,未显示活性。结论已成功获得甘油脱水酶α亚基蛋白,为进一步研究其生物学性能奠定了基础。
|
关 键 词: | 甘油脱水酶 α亚基 克隆 表达 纯化 活性 |
文章编号: | 1004-5503(2008)01-019-04 |
收稿时间: | 2007-08-26 |
修稿时间: | 2007-08-26 |
本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录! |
|