| 摘 要： | 目的 采用慢病毒干扰水通道蛋白4(AQP4)的表达,观察电压依赖性阴离子通道2(VDAC2)在脊髓损伤后的表达变化,探讨VDAC2的差异性表达对脊髓损伤修复过程的影响。方法 将SD大鼠随机分为脊髓钝挫伤(SCC)组、假手术(Sham)组、AQP4慢病毒干扰(AQP4-SH-LV)组、空载(Vector)组。采用Allen’s法制备SCC模型;Gene MANIA生物信息学方法预测AQP4与VDAC2的关联;通过注射包装AQP4 siRNA的质粒,构建慢病毒干扰AQP4的SCC模型。BBB评分评价大鼠后肢的运动功能;HE染色显示脊髓组织损伤状况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定VDAC2 mRNA表达量;免疫组织化学染色(IHC)检测VDAC2定位及半定量情况。结果 1)BBB评分结果显示,脊髓钝挫伤后SCC组和Vector组得分显著降低,接近0分。AQP4-SH-LV组得分的下降趋势与Vector组相似,但各时间点评分均高于后者。HE染色结果显示脊髓顿挫伤后脊髓组织发生水肿,干扰AQP4后水肿程度有所减轻。2)qRT-PCR结果表明,与Sham组相比,SCC组各时间点VDAC2的mRNA转录水平降低(P<0.05);慢病毒干扰AQP4,SCC术后第7天,AQP4-SH-LV组体内VDAC2 mRNA转录水平较Vector组上调(P<0.05)。3)免疫组化结果显示:VDAC2免疫阳性产物主要分布于细胞质。SCC组各时间点VDAC2免疫阳性细胞数均低于Sham组(P<0.05);AQP4-SH-LV组各时间点VDAC2免疫阳性细胞数均高于Vector组。4) GeneMANIA结果显示,AQP4和VDAC2两分子间具有特定的生理联系,如共表达、共定位、共享蛋白质结构域等。结论脊髓损伤后,大鼠体内VDAC2的转录水平下降,不利于脊髓组织损伤后的恢复。慢病毒干扰AQP4可上调VDAC2转录水平,并促进脊髓损伤的修复。
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