昆虫融合抗冻蛋白提取方法的比较

目的 对用低温乙醇法、硫酸铵盐析法及等电点法提取的昆虫融合抗冻蛋白EGFP-OcAFP4浓度和蛋白相对得率进行比较。方法 选取不同终浓度的乙醇（5%～65%）、硫酸铵（0.2～3.0 mol/L）及pH(5.6、5.4、5.2、5.0、4.8、4.7、4.6、4.5、4.4)提取重组质粒pET28a-EGFP-OcAFP4诱导表达液破菌上清中的EGFP-OcAFP4，并检测其纯度及蛋白相对得率。结果 乙醇终浓度为30%时提取EGFP-OcAFP4的纯度最高，达86.21%，蛋白相对得率为6.89%；硫酸铵终浓度为2.0 mol/L时提取EGFP-OcAFP4的纯度最高，达42.33%，蛋白相对得率为30.83%;pH为5.0时提取EGFP-OcAFP4的纯度最高，达15.46%，蛋白相对得率为11.97%。结论 低温乙醇法、硫酸铵盐析法和等电点法均可用于EGFP-OcAFP4的提取，但低温乙醇法和硫酸铵盐析法提取蛋白的纯度及相对蛋白得率更高，更适用于EGFPOcAFP4的提取。