| 实时定量PCR检测大鼠神经激肽1受体mRNA方法的建立及评价 |
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| 引用本文： | 姚刚,满玉红,毛西京,于挺敏. 实时定量PCR检测大鼠神经激肽1受体mRNA方法的建立及评价[J]. Canadian Metallurgical Quarterly, 2011, 37(2) |
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| 作者姓名： | 姚刚 满玉红 毛西京 于挺敏 |
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| 作者单位： | 吉林大学第二医院神经内科,吉林,长春,130041 |
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| 基金项目： | 吉林省科技厅科研基金课题 |
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| 摘 要： | 目的:建立检测大鼠神经激肽1(NK1)受体mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法,为检测大鼠NK1受体基因表达提供有效的手段.方法:提取大鼠中脑总RNA,扩增NK1受体基因片段,将其克隆入pMD-18T载体,制作NK1受体标准品质粒;应用SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料,对连续稀释的标准品质粒进行实时PCR分析,评价所建立方法的检测灵敏度;对PCR产物进行溶解曲线分析评价其特异性.结果:成功构建NK1受体标准品质粒,经酶切及测序鉴定,目的片段已插入pMD-18T载体;所建立的实时定量PCR方法的最低检测限度均为每反应102个拷贝,在每反应102～109拷贝范围内,荧光信号达到设定阈值所经历的循环数(Ct值)与起始模板浓度具有良好的线性关系,r=0.999.结论:所建立的检测大鼠NK1受体mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法具有敏感性高、特异性强和线性范围广等特点,适用于对大鼠各种组织NK1受体的大量样本检测.
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| 关 键 词： | 实时定量PCR SYBR Green Ⅰ 神经激肽 大鼠,Wistar |
Establishment and evaluation of detection method of neurokinin-1 receptor Mrna in rats using real-time PCR |
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