| 摘 要： | 普鲁兰酶是高效利用淀粉的关键酶之一,选育普鲁兰酶高产菌株对其工业化应用具有重要意义。从土壤中筛选得到一株产普鲁兰酶菌株L5,产酶活力为10.83 U/m L。通过16S r DNA测序和构建系统发育树,鉴定菌株L5为芽孢杆菌菌属(Bacillus genus)。以L5菌株为出发菌株采用常压室温等离子体(ARTP)技术进行诱变育种,筛选出4株普鲁兰酶高产突变菌株G1(20.33 U/m L)、G2(19.68 U/m L)、G3(19.31 U/m L)、G4(22.01 U/m L),较之前酶活性分别提高了87.7%、81.7%、78.3%、103.2%。利用正交试验优化发酵培养基,最优组合:可溶性淀粉1.5%、糊精1.0%、蛋白胨0.5%、黄豆粉1.5%、Ca~(2+)0.05%、Fe~(2+)0.10%、Zn~(2+)0.15%,在最优发酵培养基条件下,G4菌株产酶活力可达27.22 U/m L(提高了23.7%)。试验所产普鲁兰酶的最适反应温度为50℃、最适反应pH值为6.5,在30～60℃保温2 h酶活能维持在80%以上,在pH 5～9保存4 h后酶活力仍能维持在60%以上,该酶具有良好的热稳定性。
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