| Thermoanaerobacter sp. X514嗜热脂肪酶LipTX的异源表达与酶学性质研究 |
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| 引用本文： | 魏涛,杨昆鹏,郏未未,毛多斌. Thermoanaerobacter sp. X514嗜热脂肪酶LipTX的异源表达与酶学性质研究[J]. 现代食品科技, 2016, 32(11): 91-97 |
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| 作者姓名： | 魏涛 杨昆鹏 郏未未 毛多斌 |
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| 作者单位： | （郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州 450002）,（郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州 450002）,（郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州 450002）,（郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州 450002） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（21406210）；河南省科技创新杰出人才项目（144200510011） |
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| 摘 要： | 本文克隆表达了来源于嗜热细菌Thermoanaerobacter sp.X514的嗜热脂肪酶Lip TX基因(Teth514_0029),利用亲和层析纯化了脂肪酶Lip TX,并详细研究了该脂肪酶的酶学性质。采用PCR技术扩增脂肪酶Lip TX基因,克隆到载体p ET15b中,构建重组载体p ET15b-Lip TX;将重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中并利用IPTG诱导表达目的蛋白,经70℃热处理和Ni-NTA亲和层析两步纯化,得到纯化的重组酶。SDS-PAGE结果表明,脂肪酶Lip TX分子量为28 ku。酶学性质研究表明,该酶最适反应温度和pH分别为70℃和7.5;通过水解底物特异性和动力学实验,发现LipTX可以水解不同长链酰基(C_8-C_(12))的对硝基苯酚酯底物,对硝基苯酚癸酸酯是该酶最适合底物;同时该酶能够水解链长在C_4到C_(16)范围的三甘油酯底物,其中以甘油三丁酸酯为底物的酶活力最高。该酶对非极性有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮、DMF、DMSO和正己烷和氯仿)和变性剂(SDS、Tween-20和Triton X-100)具有较强的抗性,因此在生物催化和有机化学合成中具有广阔的开发应用前景。
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| 关 键 词： | 嗜热酶；脂肪酶；克隆；表达；酶学性质 |
| 收稿时间： | 2015-12-01 |
Heterologous Expression and Enzymatic Properties of Lipase LipTX from Thermophilic Bacterium Thermoanaerobacter sp. Strain X514 |
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| WEI Tao,YANG Kun-peng,JIA Wei-wei and MAO Duo-bin. Heterologous Expression and Enzymatic Properties of Lipase LipTX from Thermophilic Bacterium Thermoanaerobacter sp. Strain X514[J]. Modern Food Science & Technology, 2016, 32(11): 91-97 |
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| Authors: | WEI Tao YANG Kun-peng JIA Wei-wei MAO Duo-bin |
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| Affiliation: | (School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry, Zhengzhou 450002, China),(School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry, Zhengzhou 450002, China),(School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry, Zhengzhou 450002, China) and (School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry, Zhengzhou 450002, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | thermophilic enzyme thermophilic lipase cloning expression enzymatic property |
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