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| 呼吸道合胞病毒F1蛋白截短体(F_(212-489))的原核表达及纯化 | |
| 作者单位： | ;1.昆明理工大学医学院;2.成都军区昆明总医院核医学科;3.昆明学院医学院 |
| 摘 要： | 目的原核表达并纯化呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)F1蛋白截短体(F212-489)。方法从质粒p MD-18T-f中PCR扩增截短f1基因(f212-489),经TA克隆测序正确后,将目的片段插入原核表达载体p ET-28a,构建重组表达质粒p ET-28a-f212-489,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍离子亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒p ET-28a-f212-489经双酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为30 000,主要以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的10%;纯化的重组蛋白纯度为85%,可与羊抗RSV多克隆抗体特异性结合。结论成功表达了RSV F1蛋白截短体(F212-489),纯化的重组蛋白反应原性良好,为更好地研究RSV的免疫机理及通过基因工程方法研制特定部位的亚单位或多肽疫苗奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 呼吸道合胞病毒 F蛋白 截短蛋白 原核细胞 基因表达 纯化 |
Prokaryotic expression and purification of truncated protein F_(212-489) of respiratory syncytial virus |
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