| 鸡BF1和BF2基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 金元昌,李玉峰,袁志栋.鸡BF1和BF2基因实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].粉末涂料与涂装,2013,26(2):275-279. |
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| 作者姓名： | 金元昌 李玉峰 袁志栋 |
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| 作者单位： | 湖南科技大学生命科学学院,湖南湘潭,411201 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(21275047);湖南省教育厅一般项目(10C0717);湖南科技大学博士启动项目(E510C4) |
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| 摘 要： | 目的建立鸡主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)BF1和BF2基因实时荧光定量PCRReal-time fluorescent quantitative(FQ)-PCR]检测方法。方法从鸡外周血淋巴白细胞(Peripheral blood leuk-ocytes,PBLs)中提取细胞总RNA,以其为模板,根据BF1、BF2和GAPDH基因相对保守序列各设计一对引物,应用RT-PCR法扩增目的基因,分别克隆至pGM-T载体上,制备重组质粒标准品,经PCR、EcoRⅠ酶切及测序鉴定;优化反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立Real-time FQ-PCR检测方法,并验证其敏感性、特异性及重复性。结果重组质粒标准品经PCR、酶切及测序鉴定构建正确;建立的定量标准曲线临界循环数(Threshold cycle,Ct)与BF1、BF2和GAPDH起始质粒DNA拷贝数的对数之间线性关系良好,相关系数分别为1.00、0.98、0.99,扩增效率分别为0.8、1.1、1.1;该方法的敏感性可达101copies/μl;融解曲线分析表明扩增效率一致,特异性较好;质粒DNA标准品3次检测的CV值误差不超过0.5,均小于5%。结论已成功建立了鸡BF1和BF2基因实时荧光定量PCR检测方法,为下一步应用该法检测BF1和BF2基因的转录水平奠定了基础。
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| 关 键 词： | 主要组织相容性复合体 实时荧光定量PCR |
Development of a real-time fluorescent quantitative PCR assay for BF1 and BF2 genes in chickens |
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| JIN Yuan-chang,LI Yu-feng,YUAN Zhi-dong.Development of a real-time fluorescent quantitative PCR assay for BF1 and BF2 genes in chickens[J].Chinese Journal of Biologicals,2013,26(2):275-279. |
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| Authors: | JIN Yuan-chang LI Yu-feng YUAN Zhi-dong |
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| Affiliation: | College of Life Science,Hunan University of Science and Technology,Xiangtan 411201,Hunan Province,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Major histocompatibility complex(MHC) Real-time fluorescent quantitative PCR |
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