| 人肝细胞生长因子基因真核表达质粒的构建及其在人骨髓间充质干细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 崔洁,蒋明德,梅浙川,陈丽,曾维政,郑淑梅,王钊. 人肝细胞生长因子基因真核表达质粒的构建及其在人骨髓间充质干细胞中的表达[J]. 中国生物制品学杂志, 2013, 26(1): 27-31,35 |
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| 作者姓名： | 崔洁 蒋明德 梅浙川 陈丽 曾维政 郑淑梅 王钊 |
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| 作者单位： | 1. 成都军区总医院消化科,四川成都,610083
2. 重庆医科大学附属第二医院消化科,重庆,400016 |
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| 摘 要： | 目的构建人肝细胞生长因子(Human hepatocyte growth factor,hHGF)真核表达质粒,并检测其在人骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中的表达及其对细胞生长的影响。方法采用密度梯度法从人骨髓中分离BMSCs,流式细胞术检测细胞表型,成脂及成骨诱导其分化。PCR扩增hHGF基因,定向克隆至pEGFP-N1载体中,构建重组表达质粒pEGFP-N1-hHGF,通过电穿孔法转染BMSCs,荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR及Western blot法检测hHGF基因mRNA的转录及蛋白的表达,MTT法检测hHGF对BMSCs增殖活力的影响。结果 BMSCs高表达CD29和CD44,不表达CD34和CD45;BMSCs在体外有向成脂及成骨细胞诱导分化的能力。酶切及基因测序证实,重组表达质粒pEGFP-N1-hHGF构建正确;转染后48 h观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达;RT-PCR法和Western blot检测到hHGF基因在BMSCs中表达;转染hHGF基因的BMSCs增殖活力明显高于空白对照组和空载体转染组(P<0.05)。结论成功构建了hHGF基因真核表达质粒,转染人BMSCs后获得表达,表达的hHGF可促进BMSCs增殖。
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| 关 键 词： | 骨髓间充质干细胞 人肝细胞生长因子 转染 表达 |
Construction of eukaryotic expression vector for human hepatocyte growth factor and its expression in human bone marrow mesenchymal stem cells |
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| CUI Jie,JIANG Ming-de,MEI Zhe-chuan,CHEN Li,ZENG Wei-zheng,ZHENG Shu-mei,WANG Zhao. Construction of eukaryotic expression vector for human hepatocyte growth factor and its expression in human bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Chinese Journal of Bilogicals, 2013, 26(1): 27-31,35 |
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| Authors: | CUI Jie JIANG Ming-de MEI Zhe-chuan CHEN Li ZENG Wei-zheng ZHENG Shu-mei WANG Zhao |
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| Affiliation: | Department of Gastroenterology,General Hospital,Chengdu Military Command,Chengdu 610083,Sichuan Province,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs) Human hepatocyte growth factor(hHGF) Transfection Expression |
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