| 腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法的建立及验证 |
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| 引用本文： | 孟凡红,刘先超,王爽,李晶,沙雪艳,黄金凤,尹卫东. 腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法的建立及验证[J]. 中国生物制品学杂志, 2014, 0(11): 1463-1467,1472 |
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| 作者姓名： | 孟凡红 刘先超 王爽 李晶 沙雪艳 黄金凤 尹卫东 |
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| 作者单位： | 科兴(大连)疫苗技术有限公司 |
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| 摘 要： | 目的建立腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法,并进行验证。方法针对腮腺炎减毒活疫苗株S79血凝素(hemagglutinin,H)基因保守区域设计特异性引物和Taq Man荧光探针;以05008批腮腺炎减毒活疫苗S79株成品作为参考品,将参考品或供试品稀释后,接种于长成单层的Vero细胞中,采用低渗合并冻融法将细胞破碎,吸取上清,进行荧光定量RT-PCR。优化病毒感染时间,并对该方法的特异性、精密性及准确性进行验证。结果病毒感染的最佳时间为18 h;建立的荧光定量RT-PCR法只对腮腺炎减毒活疫苗具有特异性扩增,对灭活的腮腺炎减毒活疫苗、水痘病毒、狂犬病病毒、麻疹病毒、风疹病毒和Vero细胞均无扩增曲线出现;该方法检测4个浓度(1、1:5、1:52、1:53)样品6组数据的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均5%,不同操作人员于不同日期检测4个浓度(1、1:5、1:52、1:53)样品的标准曲线回归方程R2均大于0.97,RSD均5%;该方法与细胞病变法测得的11批腮腺炎减毒活疫苗成品的病毒滴度值之差均≤0.2 Lg CCID50/ml,两组数据差异无统计学意义(P0.05)。结论建立的荧光定量PCR法检测腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度特异性较强,精密性和准确性良好,且快速方便,可应用于企业生产过程中的内部质控。
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| 关 键 词： | 腮腺炎减毒活疫苗S79株 荧光定量逆转录-聚合酶链反应 病毒感染性滴度 |
Development and verification of a fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction assay for infectious titer of live attenuated mumps vaccine |
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