席夫碱法制备大孔聚合物肝素亲和层析介质

肝素亲和层析介质因其专一性好、操作条件温和等特点，广泛应用于蛋白分离纯化，本工作以大孔聚丙烯酸酯微球为基质，肝素为配基，利用席夫碱法制备了肝素亲和层析介质。配基偶联经过三步完成，首先将大孔聚丙烯酸酯微球表面环氧基团通过0.5 mol/L H₂SO₄水解为邻羟基，然后将邻羟基氧化为醛基，最后利用醛基与肝素分子的胺基反应将肝素分子固定于微球表面。以溶菌酶为模型蛋白，主要考察了肝素偶联反应的各因素对蛋白结合容量的影响规律，包括肝素浓度、缓冲液pH及浓度、反应时间等，建立了最优偶联肝素配基的方法。所得亲和介质静态结合容量可达40.3 mg/mL，比商品GP-肝素介质高约36%，经1.0 mol/L的氯化钠洗脱，其蛋白回收率达到95%。通过扫描电子显微镜表征微球表面形貌，观察到偶联肝素后的微球仍能保持其大孔结构。考察了该类亲和介质在不同操作流速(31.8～318 cm/h)下的动态结合容量，发现操作流速提高10倍后介质结合容量仅下降12%。经10次重复使用后，动态结合容量仍可保持初始容量的81%。用于混合蛋白模型中分离乳铁蛋白，结果表明具有良好的分离效...